豬睪丸細(xì)胞懸浮適應(yīng)株,；ST-2014S說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療。

細(xì)胞名稱 豬睪丸細(xì)胞懸浮適應(yīng)株,；ST-2014S說明書
形態(tài)特性  上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞屬專利保藏,，其特征特性尚未公開。 
培養(yǎng)條件  MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,，3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 陰性
STR 
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 未定

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲(chǔ)存,。
二、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC,、DSMZ、JCRB等,，購買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測(cè),，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min,，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

5g    β- 硫代巴比妥酸    
100mL    MAL 指示劑培養(yǎng)基    
25mg    S(-) 雷氯必利 (+)- 酒石    
100 次     胎盤堿性磷酸酶檢測(cè)試劑盒    
800U    Bst DNA 聚合酶，大片段    
戊二醛磷酸緩沖固定液    131278-250    250 mL
96 孔板病毒 RNAout( 真空法 )    131191-1    1次
25mg    尿苷 -5'- 二磷酸    
1次    96 孔板病毒 RNAout( 離心法 )    
10mg    DiO( 細(xì)胞膜綠色熒光探針 )    
1g    溶壁酶干粉    
Fluo-3AM( 鈣離子熒光探針 )    22-0300-250    250μL
非凍型尿液 DNA 保存液    90315-15    15mL
50 次    葡萄球 RNAout    
500mg    崩潰酶    大鼠輸尿管上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
氰化高鐵血紅蛋白參比液(4種×2套) /Cyanomethemoglobin reference solution        國產(chǎn)/進(jìn)口    10毫升×8支    
WPMY-1(人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基（不含瓊脂）/需氣菌厭氣菌培養(yǎng)基/Thioglycollate Medium（Without Agar）    用于產(chǎn)氣莢膜梭菌確證試驗(yàn)的細(xì)菌培養(yǎng)（GB,、SN標(biāo)準(zhǔn)）    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
SDS-PAGE濃膠緩沖液(4x)    200ml        國產(chǎn)    
MDA-MB-436(人腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
NCI-H838(人非小細(xì)胞肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
Y1(Y-1) (小鼠腎上腺質(zhì)細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
HL-60(人早幼粒急性白血病細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
HCCLM3(人高轉(zhuǎn)移肝細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
胰腺腺    英文名稱：        Panc10.05    
麥康凱瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/麥康克瓊脂(不含NaC1和結(jié)晶紫)/MacC    革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)(抑制變形桿菌蔓延)    國產(chǎn)/進(jìn)口    250克    
KATO III(人胃細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
人前列腺平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
H4-IIE(大鼠肝細(xì)胞 )    5×106cells/瓶×2        
1mg    Z-VAD-FMK(Caspase Inhibitor)    
600U    核糖核酸酶 H    
大鼠內(nèi)皮細(xì)胞分離液 1.066    120892-200    200mL
土壤 DNAout    60701-100    100 次
0.1mL×10    Rosetta(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞    
1g    潮 B    
100 次    液相內(nèi)毒素清除劑