綿羊肺細(xì)胞；OAR-L1說明書【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療,。

細(xì)胞名稱 綿羊肺細(xì)胞；OAR-L1說明書
形態(tài)特性  成纖維細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞系來源于一雌性綿羊的肺組織,。1990年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立,。 
培養(yǎng)條件  McCoy's 5A Media (Modified with Tricine)  15%NBS
傳代方法  1：2傳代；3-4天一次
傳代情況 P2
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 熒光法（-）
STR  -
同工酶 
染色體 
使用權(quán)限 A類

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實驗室擴增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，100%進口來源,，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細(xì)胞瓶，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),。

Raji(人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
Dami(人巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
MSTO-211H(人肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2    gersion        
RH-35(大鼠肝細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
II型膠原酶(含100mL酶解緩沖液)    10mL            
CHL(倉鼠肺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
Flag Tag IP/Co-IP Kit/Flag標(biāo)簽免疫沉淀試劑盒    25次        試劑盒    
小鼠食管上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
BC-019(人腺細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2            
小鼠腸上細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
胰酶細(xì)胞消化液    規(guī)格：        100ml    
人胎盤絨毛膜細(xì)胞*培養(yǎng)基    100mL            
MCPC培養(yǎng)基添加劑/MCPC Medium Supplement    每瓶添加于100ml MCPC培養(yǎng)基中    國產(chǎn)/進口    5毫升    
人卵巢細(xì)胞    英文名稱：        HO-8910    
大腸桿菌&大腸菌群顯色培養(yǎng)基/E.Coli&Coliform Chromogenic Medium    同時檢測大腸菌群和大腸桿菌,，培養(yǎng)24小時，大腸桿菌顯紫色,，大腸菌群顯紅色    國產(chǎn)/進口    1升    
尼氏(Nissl)染色液    規(guī)格：        100ml    
賴氨酸脫羧酶培養(yǎng)基/Lysine Decarboxylase Medium    用于細(xì)菌賴氨酸脫羧酶試驗    國產(chǎn)/進口    5克  瓊脂糖凝膠 2B    CAS9050-94-6    100mL
SDS-PAGE 分離膠配膠液    100868-500    500mL
10 次    柱式植物 mtDNAout,，測序    
10g    硫酸葡聚糖    
5 mg    羧肽酶 B( 豬胰 )    
50 T    ATP 酶測試盒 ( 組織及細(xì)胞膜需高速離心 )    
羧肽酶 B( 豬胰 )    CAS9025-24-5    5 mg
山羊抗小鼠 IgG(H+L), 堿性磷酸酶標(biāo)記    131144-100    100μL
大提柱式動物 RNAout    80901-5    5次
50 次    木材 DNAout    
10g    4- 甲基傘形酮    
5mL    卵巢上皮細(xì)胞生長因子    
1.5mL    β- 乙醇，電泳    
尿道上皮細(xì)胞生長因子    21-0240-5     5mL
RNase-free Tris HCl,1M,pH 6.5    60704-100    100mL
2mg    PD 98059(MAPKK 抑制劑 )    
250 mL    Baker 甲醛鈣中性固定液    
18mg    Insulin    
100g    RNA  EDTA·2Na ( 乙二胺四二 )    
L-Arginine(NO 前體 )    23-0360-5    5g
柱式尿液 DNAout    90314-50    50 次
100mL    RNA 電泳液 ,10×    
100 μL    COX IV 小鼠單抗    
5mL    dNTP 溶液,，2.5mM