人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞,；LS 174T圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞,；LS 174T圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  該細(xì)胞是LS 180結(jié)腸腺癌細(xì)胞株的胰蛋白酶化變種,。它比親本更易傳代，像LS 180一樣生成大量的癌胚抗原(CEA),。電鏡研究表明,，它有豐富的微絲和胞漿黏液素液泡；血清學(xué)檢測直腸抗原3陽性,；p53抗原表達(dá)陰性,，但mRNA表達(dá)陽性；角蛋白陽性,；癌基因c-myc,、N-myc、H-ras,、N-ras,、Myb和fos的表達(dá)呈陽性；癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測,；可產(chǎn)生IL-10,、IL-6和黏蛋白。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C104
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%,。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%,；二氧化碳，5%,。 溫度：37攝氏度,，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基,，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存,。
二、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基,，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時,，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘,，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中,，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等，購買到貨后,，由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，100%進(jìn)口來源,，100%保證5代以內(nèi)，活力>95%,，無細(xì)菌,、真菌、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中,，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤洗細(xì)胞,，加入適量胰酶,，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察,，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶，加入新鮮培養(yǎng)基,，晃動細(xì)胞瓶,，終止胰酶作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,，制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,，避免產(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi),，1000rpm離心5min,，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基,，用吸管小心吹散沉淀,，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng)。

丙酮酸激酶2mg
雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V- 熒光素 647·7-AAD）50 次
CAS504-17-6β- 硫代巴比妥酸5g
100810-1000超快蛋白銀染試劑盒1000mL
α-Actin 小鼠單抗30μL
氯溶液 ,25mg/mL10mL
D- 半乳糖醛酸1g
羥脯氨酸測試盒( 堿水解法 )( 測動物血清,、組織,、尿液 )48 T
一站式 His 標(biāo)記蛋白質(zhì)微量純化套裝20 次
131010-50胰蛋白酶干粉50g
101120-50柱式細(xì)菌 RNA-DNA 雙提試劑盒50 次
內(nèi)毒素清除親和介質(zhì)5mL
9,10- 二甲基 -1,2 苯并蒽100g
Dansyl chloride 100mg
亞硫酸氫鹽 DNA 修飾試劑盒50 次
22-0210-25DiBAC4(3)25mg
120664-11μL 超微量分光光度計1個小鼠溶菌酶(LZM)ELISA 試劑盒96T/48T試劑盒組裝/原裝
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