人肝癌細(xì)胞,；BEl-7402圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研,，不可用于臨床診斷和治療。
細(xì)胞名稱 人肝癌細(xì)胞,；BEl-7402圖片
形態(tài)特性  上皮細(xì)胞樣
生長特性 貼壁生長
特征特性  BEL-7402細(xì)胞株是1974年從臨床肝癌手術(shù)標(biāo)本中建立的,。 細(xì)胞群體倍增時間為20小時。 移植到處理過的wistar大鼠中的能形成腫瘤結(jié)節(jié),。 細(xì)胞形態(tài)呈上皮樣細(xì)胞,。 在電子顯微鏡下亦顯示上皮細(xì)胞所具有的橋粒和張力原纖維，與臨床肝癌細(xì)胞相似,。 分瓶培養(yǎng)第四天時,，其有絲分裂指數(shù)約為7%。 BEL-7402細(xì)胞的染色體數(shù)為不足三倍體,，有一個異常的近端著絲點染色體,。 間接免疫熒光法測BEL-7402細(xì)胞內(nèi)的AFP為陽性反應(yīng)。 LDH同工酶譜顯示與成年人肝細(xì)胞不同,，而與人胚肝及臨床肝癌相近,。 
培養(yǎng)條件  DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法  1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C261
凍存條件  基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR 
同工酶 同工酶鑒定
染色體 
使用權(quán)限 A類
細(xì)胞培養(yǎng)步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%,；優(yōu)質(zhì)胎牛血清,，10%。
2,、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣,，95%；二氧化碳,，5%,。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3,、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO,，現(xiàn)用現(xiàn)配,。液氮儲存。
二,、細(xì)胞處理：
1,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)）,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3,、細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細(xì)胞變圓脫落后,，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,，再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,，應(yīng)將細(xì)胞收集,，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走）,，加入部分新鮮培養(yǎng)基,，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:    
我們的細(xì)胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,，購買到貨后，由我們實驗室擴(kuò)增,、凍存,，凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,，100%進(jìn)口來源，100%保證5代以內(nèi),，活力>95%,，無細(xì)菌、真菌,、支原體污染,。   細(xì)胞到達(dá)客戶手中，1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,，導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,，我們公司都可以免費再向客戶提供一次。
操作步驟：
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,，加少量PBS潤洗細(xì)胞,，加入適量胰酶，使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,，37℃孵育,，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動細(xì)胞瓶,，終止胰酶作用,，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液,?？刂拼荡虻牧Χ龋苊猱a(chǎn)生大量的氣泡,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng),，隔天觀察貼壁生長情況,。
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min,，棄去上清,，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個細(xì)胞瓶內(nèi),，加入新鮮培養(yǎng)基,，置37℃溫箱培養(yǎng),。

嘌呤硫酸鹽5g
miRNA 熒光定量檢測試劑盒25 次
CAS75-12-7去離子甲酰胺100mL
130681-0.83通用 miRNA 克隆接頭0.83nmol
一站式 TA 克隆試劑盒 ( 含感受態(tài) )20 次
甲基綠1g
異硫氰酸胍25g
色素細(xì)胞生長因子5mL
DNA  SDS( 十二烷基硫酸 )100g
140626-20細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-APC）20 次
90101-50大片段 DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)50μg
嗜熱菌蛋白酶25mg
動物細(xì)胞裂解液 B50mL
四硼酸，十水100g
人基因組 DNA,，男性100μg
CAS110-16-7馬來酸100g
100833-5PMSF 溶液,，10mg/mL5mL
柱式軟骨 RNAout50 次
麥芽浸粉250g
ATP 依賴的 DNase200UDAF-FM DA(NO 熒光探針 )100 次
90501-250Tth DNA 聚合酶250U
胸嘧啶5g
植物血球凝集素 P5mg
4’,6- 二脒基 -2- 苯基吲哚二鹽酸鹽10mg
大提柱式血液 RNAout5次
CAS9004-54-0葡聚糖 T-50010g
α- 氰基 -4- 羥基肉桂酸10g
超敏化學(xué)發(fā)光 (HRP) 檢測試劑盒（ECL）25mL
G(5′)ppp(5′)G 帽結(jié)構(gòu)類似物25 OD
120101-2谷胱甘肽瓊脂糖2mL
140625-20雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒（Annexin V-APC·7-AAD） 20 次
19-0060-100 F12 培養(yǎng)基 ( 含 10% 胎牛血清 )100mL
兔抗 His 標(biāo)簽多抗，HRP 標(biāo)記100μL
二甲基亞砜100mL
長效期 SDS-PAGE 還原劑10mL
120668E-10.5mLDNA 離心超濾管 (300-500 KD)1個
海腎熒光素酶報告基因檢測試劑盒100 次
加拿大樹膠100mL
非凍型血液 RNA 保存液100mL
口腔拭子 ( 醫(yī)用簡裝 ) 20只/袋