詳細介紹
人神經(jīng)上皮瘤細胞;SK-N-MC圖片【溫馨提示】細胞用途:只可用于科研,,不可用于臨床診斷和治療,。
細胞名稱 人神經(jīng)上皮瘤細胞;SK-N-MC圖片
形態(tài)特性 上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 這株細胞與HTB-11都是神經(jīng)源的。1971年9月分離得到SK-N-MC后,,發(fā)現(xiàn)它有中性多巴胺-β-羥化酶活性,,也有細胞內(nèi)兒茶酚胺,用甲醛可以誘導出熒光,。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 胎牛血清,,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2,。3天內(nèi)可長滿,。
傳代情況 PN5
凍存條件 *培養(yǎng)基+8%DMSO
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 A類
細胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%,;優(yōu)質胎牛血清,10%,。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存,。
二,、細胞處理:
1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細胞密度,。
2,、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。貼壁細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存,。懸浮細胞凍存時,,應將細胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存,。
質量保證:
我們的細胞株來源于ATCC,、ECACC、DSMZ,、JCRB等,,購買到貨后,由我們實驗室擴增,、凍存,,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,100%進口來源,,100%保證5代以內(nèi),,活力>95%,無細菌,、真菌,、支原體污染。 細胞到達客戶手中,,1個月內(nèi)出現(xiàn)任何問題,,導致細胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺內(nèi),,吸除或倒掉細胞瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤洗細胞,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細胞,,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細胞間間隙變大,、細胞趨于圓形但還未漂起時棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動細胞瓶,,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細胞,,制成細胞懸液,。控制吹打的力度,,避免產(chǎn)生大量的氣泡,,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長情況。
2)懸浮細胞傳代:將細胞懸液轉移到無菌離心管內(nèi),,1000rpm離心5min,,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,,制成細胞懸液,將細胞懸液分別接種到另外的2~3個細胞瓶內(nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng)。
101219-50即用型熒光定量 RT-PCR 試劑盒50 次
131198-1一步法 96 孔板質粒 DNAout( 真空法 )1次
FTA 血片 DNAout50 次
細胞計數(shù)液 (Vi-CELL 儀 )100 次
22-0070-0.2Actin-Tracker Green( 微絲綠色熒光探針 )0.2mL
四氮唑藍 (NBT)250mg
酸性品紅5g
Carboxy-PTIO( 一氧化氮清除劑 )50mg
BamHI2000U
120307-5000SP6 RNA 聚合酶5000U
鹽酸四環(huán)素溶液 ,50mg/mL10mL
蒽酮25g
環(huán)孢霉素 A 溶液 ,10mg/mL1mL
130696-25G(5′)ppp(5′)A 帽結構類似物25 OD
一站式 GST 標記蛋白質微量純化套裝20 次
WB600 枯草宿主菌菌種1mL人腺高轉移細胞英文名稱:MDA-MB-435
大鼠腦動脈血管內(nèi)細胞*培養(yǎng)基100mL
NCI-H2227(人小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2gersion
Caki-1, 人腎透明細胞膚轉移細胞
SIM動力培養(yǎng)基/SIM培養(yǎng)基/Motility Test Medium(Semisolid)李氏菌動力觀察,,H抗原位相變異試驗,;硫化氫、動力,、吲哚試驗250克國產(chǎn)/進口
雙歧桿菌BS培養(yǎng)基/BS Medium用于雙歧桿菌的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
hFOB 1.19(SV40轉染人成骨細胞)5×106cells/瓶×2
胰凝蛋白酶(含10mL酶解緩沖液)1mL
人腺細胞英文名稱:MDA-MB-468
大鼠腦動脈血管平滑肌細胞*培養(yǎng)基100mL
NCI-H226(人肺鱗細胞)5×106cells/瓶×2gersion
Caki-2(人腎透明細胞細胞)5×106cells/瓶×2
SD-39瓊脂/SD-39 Agar濾膜法大腸桿菌O157的分離培養(yǎng)250克國產(chǎn)/進口
人呼吸道上細胞*培養(yǎng)基100mL
綠膿菌素測定用培養(yǎng)基/PDP瓊脂/King Medium A綠膿菌色素測定250克國產(chǎn)/進口
Western Blot封閉液Ⅰ(BSA,pH7.5)/Blocking Buffer(BSA)500ml100ml,、500ml
NCI-H358(人非小細胞肺細胞)5×106cells/瓶×2
D- 半乳糖醛酸1g
Red-Pfu DNA 聚合酶100U
130413-5肝素瓊脂糖5mL