詳細(xì)介紹
青色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞;HCT116-CFP圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,,不可用于臨床診斷和治療,。
細(xì)胞名稱(chēng) 青色熒光蛋白標(biāo)記人結(jié)直腸癌細(xì)胞;HCT116-CFP圖片
形態(tài)特性 上皮樣,;多角形
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 CFP穩(wěn)定表達(dá)
培養(yǎng)條件 IMDM: Iscove's Modiefied Dulbecco's Medium 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,;3~4天1次。
傳代情況
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二,、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,購(gòu)買(mǎi)到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),,100%進(jìn)口來(lái)源,,100%保證5代以內(nèi),,活力>95%,無(wú)細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),,吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,,制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,,避免產(chǎn)生大量的氣泡,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),,1000rpm離心5min,,棄去上清,,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,制成細(xì)胞懸液,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),,加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng)。
T4 RNA 連接酶 2( 截短型 )2000U
蛋白酶 K 溶液,,10mg/mL1.5mL
Tricine-SDS-PAGE 配膠液1000mL
小鼠抗 GFP 標(biāo)簽單抗100μL
131027-250胃蛋白酶250mg
130914-2dGTP 溶液,,2.5mM2mL
通用洗柱液250mL
二硫赤蘚醇1g
α- 環(huán)狀糊精250mg
絲狀真菌線粒體 DNAout15 次
CAS56-41-7L- 丙氨酸25g
131129N-100轉(zhuǎn) Lectin 基因植物 PCR Mix100 次
細(xì)胞計(jì)數(shù)液 (Vi-CELL 儀 )100 次
剛果紅5g
赤蘚紅 B 二鹽5g
DNA 上樣液 ( 紅 ),6×( 非甘油 )10mL
CAS9007-43-6細(xì)胞色素 C100mg
12-235JF1125 菌種1mLSolvent Violet 13試劑81-48-1
Diflubenzuron除蟲(chóng)脲35367-38-5
Cobalt sulfate heptahydrate硫酸鈷,七水10026-24-1
2-Carboxybenzaldehyde鄰羧基119-67-5
Hexyl acetate乙酸己酯142-92-7
(R)-(+)-2,2'-Bis(diphenylphosphino)-1,1'-binaphthyl(R)-(+)-2,2'-雙(二膦基)-1,1'-聯(lián)萘76189-55-4
Ethylenediaminetetraacetic acid乙四乙酸60-00-4
6-THIOGUANOSINE6-硫鳥(niǎo)嘌呤核苷85-31-4
Bisoprolol fumarate富馬酸比索洛爾104344-23-2
ADENOSINE-5'-MONOPHOSPHATE DISODIUM SALTAMP149022-20-8
(1S,2S)-(+)-N-(4-Toluenesulfonyl)-1,2-diphenylethylenediamine(1S,2S)-(+)-N-對(duì)磺?;?1,2-二基乙167316-27-0
Ethyl isobutyrate異丁酸乙酯97-62-1
Sodium levothyroxine左旋狀腺素25416-65-3
3-(3-AMINOPHENYL)PROPIONIC ACID間氨基丙酸1664-54-6
Eugenol丁香酚97-53-0
NA水質(zhì)標(biāo)樣
NA有機(jī)擔(dān)體
Aminomethanesulfonic acid氨基磺酸13881-91-9
N-Boc-1,4-cyclohexanediamineN-Boc-1,4-環(huán)己195314-59-1
3,5-Dimethylphenylacetic acid3,5-二基乙酸42288-46-0
亞精胺 ( 精脒 )1g
環(huán)狀 DNA 全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次
地塞米松100mg
堿性磷酸酶標(biāo)記親和素100mg