詳細(xì)介紹
人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R圖片【溫馨提示】細(xì)胞用途:只可用于科研,,不可用于臨床診斷和治療,。
細(xì)胞名稱(chēng) 人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞;NCI-H295R圖片
形態(tài)特性 上皮樣
生長(zhǎng)特性 貼壁生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞系源于多能腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系NCI-H295,,后者由Gazdar AF等建立,,從腎上腺皮質(zhì)的腫瘤中分離而來(lái)。NCI-H295細(xì)胞經(jīng)改變培養(yǎng)條件獲得了NCI-295R細(xì)胞,,群體倍增時(shí)間從原來(lái)的5天減為2天,。NCI-295細(xì)胞懸浮生長(zhǎng),而NCI-H295R呈單層貼壁生長(zhǎng),。NCI-H295R細(xì)胞保留了產(chǎn)生雄激素的能力,,對(duì)血管緊張素Ⅱ和鉀離子有反應(yīng)。
培養(yǎng)條件 DMEM/F12(1:1): Ham's F12/DME Medium (DME H-16/F-12 50% Mixture w/o HEPES, with NEAA Medium) Nu-Serum I, 2.5%,;15 mM HEPES+0.00625 mg/ml insulin+0.00625 mg/ml transferrin+6.25 ng/ml selenium+1.25 mg/ml bovine serum albumin+0.00535 mg/ml linoleic acid
傳代方法 1:3~1:4傳代,;每周換液2~3次。
傳代情況 C3
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè) 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X,;CSF1PO:10,,12;D13S317:13,;D16S539:11,;D18S51:17;D19S433:13,;D21S11:32.2,;D2S1338:25;D3S1358:15,,16,;D5S818:12;D7S820:9,,12,;D8S1179:13;FGA:19.2,,24,;TH01:9.3;TPOX:8,;vWA:17,,18;
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類(lèi)
細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1,、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%,。
2,、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37攝氏度,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3、凍存液:90%*培養(yǎng)基,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存,。
二,、細(xì)胞處理:
1、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,,培養(yǎng)),。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1)棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4)將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存,。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),,加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存,。
質(zhì)量保證:
我們的細(xì)胞株來(lái)源于ATCC、ECACC,、DSMZ,、JCRB等,購(gòu)買(mǎi)到貨后,,由我們實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增,、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過(guò)QC檢測(cè),,100%進(jìn)口來(lái)源,,100%保證5代以內(nèi),,活力>95%,無(wú)細(xì)菌,、真菌,、支原體污染。 細(xì)胞到達(dá)客戶手中,,1個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)任何問(wèn)題,,導(dǎo)致細(xì)胞在凍存前死亡,我們公司都可以免費(fèi)再向客戶提供一次,。
操作步驟:
1)貼壁細(xì)胞傳代:提前將培養(yǎng)基,、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱,用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi),,吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液,,加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞,加入適量胰酶,,使胰酶的量能蓋住細(xì)胞,,37℃孵育,每隔2~3min顯微鏡下觀察,,待貼壁細(xì)胞間間隙變大,、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去胰酶,加入新鮮培養(yǎng)基,,晃動(dòng)細(xì)胞瓶,,終止胰酶作用,用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞,,制成細(xì)胞懸液,。控制吹打的力度,,避免產(chǎn)生大量的氣泡,,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),,隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。
2)懸浮細(xì)胞傳代:將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無(wú)菌離心管內(nèi),,1000rpm離心5min,,棄去上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,,用吸管小心吹散沉淀,,制成細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi),加入新鮮培養(yǎng)基,,置37℃溫箱培養(yǎng),。
黃嘌呤氧化酶5u
非變性蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)25mg
CAS5704-04-1N- 三 ( 羥甲基 ) 甲基甘氨酸10g
131108-1ONPG 干粉1g
β-D- 阿糖胞苷50mg
MEQ,(6- 甲氧 -N- 乙基喹啉碘 )100mg
1,,3-二[三(羥甲基)甲氨基]丙烷5g
抑制與產(chǎn)生超氧陰離子自由基測(cè)試盒 ( 比色法 )50 T
酸洗玻璃珠系列10g
131288-250Maximov 固定液250 mL
81103-25一站式真菌 mRNAout25 次
檸檬酸 ( 無(wú)水 )100g
Ac-IETD-FMK(Caspase8Inhibitor)20μL
Indo-1,,五銨鹽1mgGlyoxylic acid monohydrate乙酸水合物563-96-2
Sodium dehydroacetate脫氫醋酸4418-26-2
KASUGAMYCIN HYDROCHLORIDE HYDRATE春雷霉素酸19408-46-9
D-Phenylalanine methyl ester hydrochlorideD-丙氨酸酯酸13033-84-6
COPPER(II) HEXAFLUOROACETYLACETONATE HYDRATE, 98雙(六乙酰丙)合銅(II)水合物155640-85-0
2-BROMO-5-METHOXYANILINE2-溴-5-氧基胺59557-92-5
Sodium 1-octanesulfonate1-烷磺酸5324-84-5
Furfuryl thioacetate乙酸糠硫醇酯13678-68-7
5-BROMO-4-CHLORO-3-INDOLYL B-D-5-溴-4--3-吲哚基-BETA-D-葡糖苷酸環(huán)己胺114162-64-0
2,6-Difluoroaniline2,6-5509-65-9
1-PHENOLPHTHALEIN1-酚酞
2-Amino-4-chlorobenzoic acid2-氨基-4-酸89-77-0
4-N-PROPOXYBENZALDEHYDE4-丙氧基5736-85-6
Hydroxyurea羥基脲127-07-1
2,2'-Biquinoline2,2'-聯(lián)喹啉119-91-5
NA3%化胰胳胨大豆瓊脂
2-Azabicyclo[2.2.1]hept-5-en-3-one2-氮雜雙環(huán)[2.2.1]庚-5--3-49805-30-3
環(huán)狀 DNA 全基因組擴(kuò)增試劑盒30 次
22-0430-10Lucigenin( 光澤精 )10mg
90901-200菌體內(nèi)毒素清除劑200mL