旋毛蟲通用探針法熒光PCR檢測試劑盒實驗過程：

一、試劑準備

1. DNA模板

2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中,，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,，而不能從無到有，憑空合成,。這一小段序列就是你所要有設計的引物,。可以是DNA也可以是RNA,，一般20多bp,，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此,，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP,、dCTP、dGTP,、dTTP各2mM

5．Taq酶

二,、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中,。

    10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

      引物1（10pM）               2μl

      引物2（10PM）              2μ

      Taq酶（2U/μl）            1μl

      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl

      加ddH2O至               50 μl

   視PCR儀有無熱蓋,，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增,。一般：在93℃預變性3-5min,，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次,，后在72℃ 保溫7min,。

3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。

4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油,，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油,；否則,，直接取5-10μl電泳檢測

三、注意事項

１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行,。好設立一個的PCR實驗室,。

２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果,，純化的方法越簡單越好,。

３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套,。

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