金龜子綠僵菌小孢變種注意事項(xiàng)：

1.  取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套,，護(hù)目鏡。此項(xiàng)尤為重要,，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸,。
2.  凍存液的問題：凍存液的配置已是常識,，在這里不作詳述，但二甲基亞砜（DMSO）對細(xì)胞不是*無毒副作用,，在常溫下,，二甲基亞砜對細(xì)胞的毒副作 較大，因此,，必須在1-2min內(nèi)使凍存液*融化,。如果復(fù)蘇溫度太慢，會造成細(xì)胞的損傷，二甲基亞砜（DMSO）選擇進(jìn)口產(chǎn)品,。
3.  離心前須加入少量培養(yǎng)液,。細(xì)胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,，以減少對細(xì)胞的損傷,。
4.  離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),，第二天換液,。因?yàn)殡x心的目的是兩個，去除 DMSO,，去除死細(xì)胞,，這個是標(biāo)準(zhǔn)流程，但對一般人來說,，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,，轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少，細(xì)胞就全被扔掉了,，轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會受壓過大,， 死亡。此外在操作過程中容易污染,，所以不推薦,。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細(xì)胞有一定的毒副作用,，所以須將離心后的液 體前倒凈,，且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,，結(jié)果無有異常,。
5.  細(xì)胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細(xì)胞解凍時1ml細(xì)胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗(yàn)中的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為培養(yǎng)基越少細(xì)胞越容易貼附,。
6.  復(fù)蘇細(xì)胞分裝的問題：試驗(yàn)中我的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)為復(fù)蘇1管細(xì)胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,，分裝過多，細(xì)胞濃度過低,，不利于細(xì)胞的貼壁,。
7.  加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少,，那么DMSO的濃度就會比較大,，就會影響 細(xì)胞生長，從以前的資料來看,，DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵?xì)胞沒有什么影響,，還有一個說法是1％,。所以如果你的凍存液的濃度是 10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。