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芝麻PCR檢測試劑盒實驗操作步驟:
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中,。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油,。
2.調整好反應程序,。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,,執(zhí)行擴增,。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,,循環(huán)30-35次,,后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存,。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,,以除去石蠟油,;否則,,直接取5-10μl電泳檢測。
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