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兔子乙醛脫氫酶(ALDH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒實(shí)驗(yàn)操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
24ng/ml 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
12ng/ml 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
6.0ng/ml 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.0ng/ml 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.5ng/ml 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同),、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,甩干,,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7.溫育:操作同3,。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11.測(cè)定:以空白空調(diào)零,,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
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