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兔子乙醛脫氫酶(ALDH)酶聯(lián)免疫分析試劑盒實驗操作步驟
1.標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
24ng/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
12ng/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
6.0ng/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
3.0ng/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
1.5ng/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,,拍干。
6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5,。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
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