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ATCC細胞獲得無限表達所需是試劑

時間:2018/3/6閱讀:175
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(1)ATCC細胞瞬時表達:通??梢允沟鞍自诩毎袝簳r表達數(shù)天到數(shù)周。瞬時表達常用于驗證cDNA是否能夠指導蛋白的合成,,比較表達同一蛋白的不同載體的有效性,,在進行建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞系之前,通過瞬時表達來驗證重組表達載體的正確性是十分必要的,。然而,,瞬時表達難以按比例產(chǎn)生大量蛋白質(zhì)(>1mg),此外,,整個細胞群體中只有部分細胞暫時得到蛋白表達,,不利于細胞表型的研究。

(2)穩(wěn)定表達:通過利用共轉(zhuǎn)染的標記篩選系統(tǒng),,如G418等,,對DNA轉(zhuǎn)染后的哺乳動物細胞進行選擇,使質(zhì)粒DNA穩(wěn)定整合到宿主細胞染色體上,,則可以獲得無限表達所需蛋白的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞系,。

(3)誘導表達:可誘導表達系統(tǒng)使外源基因的表達受誘導刺激強度控制,避免持續(xù)穩(wěn)定表達某些蛋白帶來的細胞毒性,,zui常用的是四環(huán)素(tetracyrcline,,tet)調(diào)控的可誘導表達系統(tǒng),具有嚴密,、,、可控制性強的優(yōu)點。該系統(tǒng)由調(diào)節(jié)質(zhì)粒和反應質(zhì)粒組成,,有兩種調(diào)節(jié)方式:①tet-off,,四環(huán)素存在時外源基因表達受抑制,而去除四環(huán)素后誘導基因表達,;②tet-on則相反,,培養(yǎng)基中有四環(huán)素時表達外源基因,無四環(huán)素時基因表達受抑制,。tet-on系統(tǒng)更容易操作,,避免誘導蛋白時清洗四環(huán)素的步驟,由于普通血清含有四環(huán)素而容易誘導不必要的蛋白表達,,因此tet-on細胞需要在無四環(huán)素的血清中培養(yǎng),。

除了質(zhì)粒表達載體以外,病毒介導的基因轉(zhuǎn)移也是將外源DNA引入不同類型細胞的有效而方便的方法,,痘苗病毒是常用系統(tǒng)之一,。痘苗病毒載體中必須表達cDNA而不是基因組克隆,病毒在感染后6小時開始形成,,一直持續(xù)2天,。痘苗病毒表達系統(tǒng)能表達多個蛋白或表達多亞基酶的幾個亞基,,例如,ATCC細胞含有不同cDNA的DTM-1載體可以共轉(zhuǎn)染到表達噬菌體T7聚合酶的細胞中以研究多種蛋白的表達,,對研究多亞基蛋白復合物的組織尤其有用,。
對照品    磺胺嘧啶    100mg    對照品
對照品    炔諾孕酮    100mg    對照品
對照品    甲萘醌    50mg    對照品
對照品    甲巰咪唑    100mg    對照品
對照品    甲氧芐啶    100mg    對照品
對照品    己酸羥孕酮    50mg    對照品
對照品    己烯雌酚    50mg    對照品
ATCC細胞

 

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