一、干細胞平衡鹽溶液(balanced salt solution,BSS):主要是由無機鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細胞滲透壓平衡,，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。主要用于取材時組織塊的漂洗,、細胞的漂洗,、配制其他試劑等。zui簡單的BSS是Ringer,。D-Hank"s與Hank"s的一個主要區(qū)別是前者不含有Ca2+,、Mg2+，因此D-Hank"s常用于配制胰酶溶液,。Earle平衡液含有較高的NaHCO3(2.2g/L),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件,，Hank"s平衡液僅含有0.35g/L NaHCO3，不能用于5%CO2的環(huán)境,，若放入CO2培養(yǎng)相，溶液將迅速變酸,，使用時應注意,。

配制溶液應使用雙蒸水或去離子水。如果配方中含有Ca2+,、Mg2+,，應當首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫滅菌,。

二,、消化液:取材進行原代培養(yǎng)時常常需要將組織塊消化解離形成細胞懸液，傳代培養(yǎng)時也需要將貼壁細胞從瓶壁上消化下來,，常用的消化液有胰酶(Trypsin)溶液和edta溶液,，有時也用膠原酶(collagenase)溶液。

1.胰酶溶液：胰酶活性可用消化酪蛋白的能力表示,，常見有1：125和1：250,，即一份胰酶可消化125或250份酪蛋白。組織培養(yǎng)用胰酶溶液一般配制成0.1-0.25%濃度,，配制時要用不含Ca2+,、Mg2+及血清的平衡鹽溶液(如前面的D-Hank"s)，因為這些物質會對胰酶產生抑制作用,。胰酶作用及溶解的*pH是8-9,，配制胰酶溶液應將液體調至pH8左右,，充分溶解，過濾除菌,。過濾后可以再調只pH7.5,，也可不調。

使用細胞清洗液配制胰酶消化液：含0.5%胰酶的細胞清洗液(100ml細胞清洗液加0.5g胰酶),，過濾除菌,，分裝于4度保存。

2.EDTA溶液：EDTA溶液也常用來解離干細胞,，它的作用機制是破壞細胞間的連接,。對于一些貼壁特別牢固的細胞，還可以用EDTA和胰酶的混合液進行消化,。EDTA溶液的使用濃度為0.02%,，配制時應加堿助溶，配制后可過濾除菌,，也可高溫消毒滅菌,。

3.膠原酶溶液：膠原酶在上皮類細胞原代培養(yǎng)時經常使用，膠原酶作用的對象是膠原組織,，因此不容易對細胞產生損傷,。膠原酶的使用濃度為0.1-0.3mg/L或200000U/L,作用的*pH為6.5。膠原酶不受Ca2+,、Mg2+及血清的抑制,，配制時可用PBS。

三,、pH調整液:常用的有HEPES液和NaHCO3溶液,。

1.NaHCO3溶液：NaHCO3是培養(yǎng)基中必須添加的成分，一般情況下按說明書的要求準確添加,，以保證培養(yǎng)基在5%CO2的環(huán)境下pH達到設計標準,。如果是封閉式培養(yǎng)，即不與5%CO2的環(huán)境發(fā)生交換達到平衡,，所使用的培養(yǎng)基就不能按照說明書所要求加入NaHCO3,。此時常用5.6%或7.4%的NaHCO3溶液調節(jié)培養(yǎng)基，使之達到所要求的pH環(huán)境,。

2.HEPES溶液：是一種弱酸,，中文名字是羥乙基哌秦乙硫磺酸，對細胞無毒性,，主要作用是防止培養(yǎng)基pH迅速變動,。在開放式培養(yǎng)條件下，觀察細胞時培養(yǎng)基脫離了5%CO2的環(huán)境，CO2氣體迅速逸出,，pH迅速升高,，若加了HEPES，此時可以維持pH7.0左右,。一般在進行克隆化培養(yǎng)時要添加HEPES,。

四、抗生素:常用的是青鏈霉素,，俗稱“雙抗溶液”,。青霉素主要是對革蘭陽性菌有效，鏈霉素主要對革蘭陰性菌有效,。加入這兩種抗生素可預防絕大多數細菌污染,。通常使用青霉素終濃度0.007-0.008g/100ml,鏈霉素終濃度0.01g/100ml。一般配制成100倍濃縮液,，可用PBS或培養(yǎng)基配制,。

五、谷氨酰胺補充液:谷氨酰胺在細胞代謝過程中起重要作用,，合成培養(yǎng)基中都要添加,，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定容易降解，4℃下放置7天即可分解約50%,，所以都是在使用前添加,。配制好的培養(yǎng)液(含谷氨酰胺)在4℃放置2周以上時，要重新加入原來量的谷氨酰胺,，故需單獨配制谷氨酰胺,，以便臨時加入培養(yǎng)液內。谷氨酰胺使用終濃度為0.002mol/L,。一般配制為100倍濃縮液，即濃度為200mmol/L(29.22g/L),，配制時應加溫30℃,，*溶解后過濾除菌，分裝至小瓶,，儲存于-20℃,。使用時，在每100ml培養(yǎng)液中加入0.5~2ml谷氨酰胺濃縮液,，終濃度為1~4mmol/L,。

六、二肽谷氨酰胺(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)

在干細胞培養(yǎng)液中L-谷氨酰胺是大部分細胞培養(yǎng)基的基本成分;而L-谷氨酰胺是一種并不穩(wěn)定的氨基酸,，在中性的水溶液中會自發(fā)降解;需要頻繁地補加L-谷氨酰胺,。因而在培養(yǎng)操作過程中經常：

(1)頻繁打開蓋子，增加了破壞無菌狀態(tài)的可能性;

(2)過多的追加L-谷氨酰胺，增加了培養(yǎng)基中氨的毒性水平,。