貨號(hào)

H001

種屬

人

細(xì)胞來(lái)源

從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)

生長(zhǎng)特性

貼壁 上皮樣

培養(yǎng)條件

培養(yǎng)基：90%DMEM(L)+10%FBS

溫度：37℃     氣相：95%空氣,，5%二氧化碳

傳代

1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,，.然后置于無(wú)菌操作臺(tái),，打開(kāi)瓶口,，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀況及培養(yǎng)基顏色變化對(duì)其進(jìn)行換液以及傳代,，一般2到3天換一次液；

2.待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)瓶底面積80%-90%,，需要對(duì)其進(jìn)行傳代,，傳代比例為1:3到1:8；

3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶,，置于37°孵育消化（第d一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見(jiàn)細(xì)胞脫落為d佳消化時(shí)間,，記錄d佳消化時(shí)間，以便于下次消化）,，消化好后加入3ml*培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落,，然后收集細(xì)胞懸液,，1200rpm離心3min，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代。

保存

凍存條件：80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO

(備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100）,，用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,，不能預(yù)熱后使用,。)

保存條件：液氮存儲(chǔ)

供應(yīng)限制

經(jīng)供研究之用

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)污染,，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決,。

2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,，請(qǐng)?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長(zhǎng)不宜超過(guò) 72 小時(shí)）

3.細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開(kāi)封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。1-2小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,，表明細(xì)胞活力正常,，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%,，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁,，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),，直到問(wèn)題解決。