sigma抗體,，sigma試劑代理,，SIGMA抗體，到貨快，*,，質(zhì)量優(yōu)，價格低,！

★CQ★上海蒂科生物專注生物科研試劑：胎牛血清FBS（HAKATA,、HyClone,、SERANA、NTC,、Corning,、BOVOGEN、PAA,、SIGMA等）,，無外泌體血清(SBI)，ELISA試劑盒（HAKATA自主品牌,、進(jìn)口）,，2萬多株細(xì)胞（含400多種類通過STR鑒定），培養(yǎng)基（干粉,、液體）,，雙抗，胰酶,，sigma試劑等,。本公司優(yōu)質(zhì)供應(yīng)原裝正品胎牛血清，*的服務(wù),、真誠的態(tài)度,、堅持以質(zhì)取勝，做您的實驗專家,。

sigma抗體,，sigma試劑代理，SIGMA抗體

★CQ★HAKATA 培養(yǎng)基,、添加劑和細(xì)胞培養(yǎng)試劑旨在實現(xiàn)重現(xiàn)性和高性能結(jié)果,，值得您每天信賴。無論您是在研究機構(gòu)或生產(chǎn)工廠進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),，或是正在培養(yǎng)細(xì)胞,，我公司HAKATA 產(chǎn)品都可以為您提供可靠的解決方案。

?

上海蒂科生物專注生物科研試劑：胎牛血清（HAKATA,、HyClone,、SERANA、NTC,、Corning,、BOVOGEN,、PAA,、SIGMA等），無外泌體血清(SBI),，ELISA試劑盒（HAKATA自主品牌,、進(jìn)口）,，2萬多株細(xì)胞（含400多種類通過STR鑒定），培養(yǎng)基（干粉,、液體）,，雙抗，胰酶,，sigma試劑等,，本公司優(yōu)質(zhì)供應(yīng)原裝正品胎牛血清，*的服務(wù),、真誠的態(tài)度,、堅持以質(zhì)取勝，做您的實驗專家,。;.

★CQ★現(xiàn)象描述:

我昨天早上傳的代,，晚上看還是好好的，培養(yǎng)基顏色正常,，今天早上9點鐘左右,，培養(yǎng)基就變渾濁了，顯微鏡下觀察細(xì)胞好多都已經(jīng)漂起來了,，明顯是污染了,，但我的培養(yǎng)液里明明加了雙抗了啊,？

這個問題等同于,，

明明有免疫系統(tǒng)的我們

為什么還是感冒了呢

★CQ★解答一

>> 加雙抗只是有一定的預(yù)防作用，但不能避免污染

現(xiàn)在很多細(xì)菌對雙抗都有耐藥性,，所以加了也不一定就能殺死,；雙抗的保存方式的問題，青霉素在37℃下很快就會分解掉,；污染的細(xì)菌是不是在抗菌譜中,；如果是真菌的話雙抗就沒有什么卵用的；

★CQ★解答二

>> 養(yǎng)細(xì)胞要從源頭做起,，杜絕各種污染

剛買來的或借來的細(xì)胞株,，一般都會在培養(yǎng)基中添加抗生素，待通過污染測試后,，大量培養(yǎng)時則不要加抗生素,；

還有就是無血清培養(yǎng)時建議zuihao不加雙抗，因為沒有血清的保護,，細(xì)胞此時是比較脆弱的,，很容易受到雙抗的毒副作用影響。

加雙抗并不是*除菌的方法,。要防止污染除了使用雙抗,，還要注意污染源大多來自換液和消化時的操作不正規(guī),，如果你在處理細(xì)胞得操作過程不規(guī)范，即便加入雙抗也很難避免污染,。就像抵抗力再強的漢紙,，如果任由自己在寒風(fēng)中、雨雪天氣里任性,，像一顆海草隨風(fēng)飄搖的話,，終有崩潰的一天。所以保證細(xì)胞處理過程或培養(yǎng)基配制過程中的無菌操作才是關(guān)鍵,。

★CQ★解答三

>> 不是所有的細(xì)胞污染都用相同的解決辦法

很多實驗室在遇到細(xì)胞污染,，準(zhǔn)確的說是懷疑細(xì)胞受到污染（原因不明導(dǎo)致的細(xì)胞狀態(tài)不好）時，都會選擇一種處理方式——扔掉,！害怕他會傳染到其他的細(xì)胞,，但是往往你們?nèi)拥舻氖?ldquo;受害者”，而沒找到“真兇”,。

并不是所有的細(xì)胞污染都能用扔掉解決,，也并不是所有的細(xì)胞污染都可以用同一種試劑解決,。

辨別細(xì)胞狀態(tài),，找到根源，“對癥下藥”才是關(guān)鍵,。

（1）細(xì)菌污染 

狀態(tài)：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,，對細(xì)胞生長影響明顯。 

解決方法： 

1.仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況,，是否在高壓滅菌時放氣時間和壓力足夠,！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,，一定要檢查培養(yǎng)液是否存在渾濁現(xiàn)象,！ 

2.可在培養(yǎng)液或血清中加支原體預(yù)防劑，以及的細(xì)菌清除劑,。 

（2）霉菌及真菌污染 

狀態(tài)：肉眼觀察培養(yǎng)基,，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色基本無變化，不渾濁,，但是培養(yǎng)基中由絮狀漂浮物,，顯微鏡下觀察，若感染真菌可看到分叉細(xì)絲狀的結(jié)構(gòu)（不同種類結(jié)構(gòu)不同）,，若感染霉菌,，顯微鏡下可看到片狀的結(jié)構(gòu)，不透明,，真菌及霉菌對影響細(xì)胞的生長影響不大,。 

解決方法： 

1.保證細(xì)胞房的干凈整潔，干燥的環(huán)境(潮濕的環(huán)境利于霉菌及真菌的生長),。 

2.控制外來人員進(jìn)出實驗室,。 

3.對實驗室及培養(yǎng)箱進(jìn)行*消毒，推薦使用專門針對細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的抑菌劑,。 

4.若細(xì)胞非常珍貴,，且不易獲得，可以對污染的細(xì)胞采取如下操作,。 

懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞并離心,，用PBS漂洗，重復(fù)此操作數(shù)次,。貼壁細(xì)胞：用PBS輕輕沖洗細(xì)胞,，重復(fù)此操作數(shù)次。加入殺滅真菌

（3）支原體感染 

狀態(tài)：顯微鏡下很難捕捉,，培養(yǎng)液一般不會渾濁,，國內(nèi)血清很多沒做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一,。而且它不能用過濾的辦法除去,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯,，只是生長緩慢,，直至慢慢凋亡。 

解決方法： 

>>預(yù)防：實驗室新購買的血清及培養(yǎng)基需檢測是否含有支原體,，引進(jìn)的新品種細(xì)胞需做支原體檢測,，向培養(yǎng)基中添加支原體預(yù)防劑。 

>>補救：將支原體去除劑與*培養(yǎng)液按1:800～1000比例稀釋,，加入細(xì)胞正常培養(yǎng),；并根據(jù)細(xì)胞污染的嚴(yán)重程度，處理3～6次即可*清除細(xì)胞支原體污染問題,。 

（4）黑膠蟲污染 

狀態(tài)：可以穿透濾膜,，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀,，高倍鏡下可看見黑色的小蟲游來游去,，培養(yǎng)液不渾濁，一般不會太影響,，細(xì)胞還可以用,。常?？稍谕慌柕难屦B(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。

解決方法：

加入黑膠蟲去除劑,，改變培養(yǎng)基的品牌,。血清凍融采取逐級凍融等方法。

（5）桿菌污染

狀態(tài)：類芽孢桿菌（Paenibacillus Ash,Priest&Collin,1994）呈桿狀,，革蘭氏染色陽性,、陰性或可變，以周生鞭毛運動,。當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)類芽孢桿菌污染,，會在顯微鏡下看到一些桿狀游動的小蟲子.

解決方法：

a. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有桿菌污染，棄掉培養(yǎng)基,，用PBS清洗3遍,；

b. 然后按1:2000 比例加入類芽孢桿菌去除劑，即：邊加邊搖勻,；

c. 每天處理一次,，類芽孢桿菌去除劑連續(xù)處理3-4天，即可*清除桿菌污染,。

除以上污染源外,，配液消毒問題、操作問題也是污染原因之一,。關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況,，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37℃試培養(yǎng)一段時間后觀察,，如果沒有細(xì)菌生長就是操作及細(xì)胞培養(yǎng)箱環(huán)境的問題,。

★CQ★細(xì)胞培養(yǎng)，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng),，就細(xì)胞消化而言,，多做、善于總結(jié),，就可以把細(xì)胞養(yǎng)的越來越好,。

★CQ★絕大部分細(xì)胞消化只要用胰酶潤洗一遍即可：

吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）,。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞,，連續(xù)這樣傳代，對細(xì)胞傷害很大,。簡單的程序是PBS潤洗吸去,，胰酶潤洗吸去，然后37度消化。

★CQ★什么算是消化好了呢,？

不需要把細(xì)胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動了,，多半呈沙壯移動,，其實已經(jīng)可以了。

一般能移動了,，說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,，細(xì)胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）,。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,，間隙很大,，才停止。

細(xì)胞就是*成單個細(xì)胞懸液,，之后在貼壁的過程中仍然會聚集,，這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性,，你可以嘗試,，準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞,，仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起,。

一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集,，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液,。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞）,，吹打不超過20次（一般10次即可）,，成小規(guī)模聚集（10個細(xì)胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間,，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn),。

★CQ★比較難消化的細(xì)胞：

潤洗方法5min還不能消化，以結(jié)腸癌細(xì)胞為例,，比如HCT15,、LS411和KM12細(xì)胞，胰酶消化,，一般10 cm 培養(yǎng)皿,，一次zui多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過5min,，即可見細(xì)胞成片移動,，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候,，比如tsDC細(xì)胞,，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動,。

★CQ★常規(guī)的細(xì)胞實驗,，受消化影響不是很大：

如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細(xì)胞例外）。但少數(shù)實驗,，比如病毒包裝,，對細(xì)胞代數(shù)，對細(xì)胞狀態(tài)要求*,。這個時候,，胰酶消化，就是潤洗,，都會對細(xì)胞包裝病毒的能力有影響,，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會逐漸下降,。這個時候都不用胰酶消化,，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性,，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面,，但不切割任何蛋白。

★CQ★EDTA的作用：

許多人不用胰酶,，只用EDTA,，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用。這里要明白,，胰酶切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白,，而EDTA通過螯合Ca離子，作用于整聯(lián)蛋白的活性,，所以EDTA的作用更加溫和,。有的人在胰酶里添加一些EDTA，或者對付特別難消化的細(xì)胞,，添加多一些EDTA,，就是這個道理。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話）,，而應(yīng)該想其它辦法,。

★CQ★PBS洗滌：

消化之前用PBS洗滌,，是常見的操作，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白,。對于一些難消化細(xì)胞,，可以配制不含Ca，Mg離子的PBS,，因為這些離子也會抑制胰酶的活性,。但對于絕大部分細(xì)胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化，不需要配制不含Ca,，Mg離子的溶液,。

每段時間定期對細(xì)胞房、培養(yǎng)箱&水盤,、水浴鍋,、廢液桶等容易染菌的個角落細(xì)菌、真菌等微生物的清除,，每次操作完都整理好細(xì)胞房,，帶好手套,、口罩,、鞋套，防止人為因素污染,。一旦發(fā)現(xiàn)污染,，及時處理。

★CQ★細(xì)胞培養(yǎng),，尤其是細(xì)胞系的培養(yǎng),，就細(xì)胞消化而言，多做,、善于總結(jié),，就可以把細(xì)胞養(yǎng)的越來越好。

★CQ★絕大部分細(xì)胞消化只要用胰酶潤洗一遍即可：

吸去胰酶后,，殘留的那些無法計算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）,。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代,，對細(xì)胞傷害很大,。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去,，然后37度消化,。

★CQ★什么算是消化好了呢？

不需要把細(xì)胞全部消化成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層,，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經(jīng)可以了,。

一般能移動了,，說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了,，細(xì)胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）,。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好,，間隙很大,，才停止。

細(xì)胞就是*成單個細(xì)胞懸液,，之后在貼壁的過程中仍然會聚集,，這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性,，你可以嘗試,，準(zhǔn)備100%的單個細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞,，仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起,。

一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集,，不要過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液,。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞）,，吹打不超過20次（一般10次即可）,，成小規(guī)模聚集（10個細(xì)胞左右）是正常的，不要再去延長消化時間,，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn),。

★CQ★比較難消化的細(xì)胞：

潤洗方法5min還不能消化，以結(jié)腸癌細(xì)胞為例,，比如HCT15,、LS411和KM12細(xì)胞，胰酶消化,，一般10 cm 培養(yǎng)皿,，一次zui多加入300ul-500ul就足夠了。即使這樣難消化的細(xì)胞,，一般不超過5min,，即可見細(xì)胞成片移動，就應(yīng)該停止消化,。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候,，比如tsDC細(xì)胞,，用胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動,。

★CQ★常規(guī)的細(xì)胞實驗,，受消化影響不是很大：

如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化的話（難消化細(xì)胞例外）。但少數(shù)實驗,，比如病毒包裝,，對細(xì)胞代數(shù)，對細(xì)胞狀態(tài)要求*,。這個時候,，胰酶消化，就是潤洗,，都會對細(xì)胞包裝病毒的能力有影響,，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會逐漸下降,。這個時候都不用胰酶消化,，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響細(xì)胞外基質(zhì)相關(guān)酶的活性,，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面,，但不切割任何蛋白。

★CQ★EDTA的作用：

許多人不用胰酶,，只用EDTA,，或者用胰酶/EDTA聯(lián)合作用,。這里要明白,，胰酶切割細(xì)胞外基質(zhì)的一些負(fù)責(zé)粘連和附著的蛋白，而EDTA通過螯合Ca離子,，作用于整聯(lián)蛋白的活性,，所以EDTA的作用更加溫和。有的人在胰酶里添加一些EDTA,，或者對付特別難消化的細(xì)胞,，添加多一些EDTA，就是這個道理,。一般不要試圖延長消化時間（如果10min還消化不*的話）,，而應(yīng)該想其它辦法。

★CQ★PBS洗滌：

消化之前用PBS洗滌,，是常見的操作,，因為血清中含有抑制胰酶的蛋白。對于一些難消化細(xì)胞,，可以配制不含Ca,，Mg離子的PBS,，因為這些離子也會抑制胰酶的活性。但對于絕大部分細(xì)胞用胰酶或者EDTA溶液潤洗即可消化,，不需要配制不含Ca,，Mg離子的溶液。

每段時間定期對細(xì)胞房,、培養(yǎng)箱&水盤,、水浴鍋、廢液桶等容易染菌的個角落細(xì)菌,、真菌等微生物的清除,，每次操作完都整理好細(xì)胞房，帶好手套,、口罩,、鞋套，防止人為因素污染,。一旦發(fā)現(xiàn)污染,，及時處理。

★CQ★解答一

>> 加雙抗只是有一定的預(yù)防作用,，但不能避免污染

現(xiàn)在很多細(xì)菌對雙抗都有耐藥性,，所以加了也不一定就能殺死；雙抗的保存方式的問題,，青霉素在37℃下很快就會分解掉,；污染的細(xì)菌是不是在抗菌譜中；如果是真菌的話雙抗就沒有什么卵用的,；

★CQ★解答二

>> 養(yǎng)細(xì)胞要從源頭做起,，杜絕各種污染

剛買來的或借來的細(xì)胞株，一般都會在培養(yǎng)基中添加抗生素,，待通過污染測試后,，大量培養(yǎng)時則不要加抗生素；

還有就是無血清培養(yǎng)時建議zuihao不加雙抗,，因為沒有血清的保護,，細(xì)胞此時是比較脆弱的，很容易受到雙抗的毒副作用影響,。

加雙抗并不是*除菌的方法,。要防止污染除了使用雙抗，還要注意污染源大多來自換液和消化時的操作不正規(guī),，如果你在處理細(xì)胞得操作過程不規(guī)范,，即便加入雙抗也很難避免污染。就像抵抗力再強的漢紙,，如果任由自己在寒風(fēng)中,、雨雪天氣里任性,，像一顆海草隨風(fēng)飄搖的話，終有崩潰的一天,。所以保證細(xì)胞處理過程或培養(yǎng)基配制過程中的無菌操作才是關(guān)鍵,。

★CQ★解答三

>> 不是所有的細(xì)胞污染都用相同的解決辦法

很多實驗室在遇到細(xì)胞污染，準(zhǔn)確的說是懷疑細(xì)胞受到污染（原因不明導(dǎo)致的細(xì)胞狀態(tài)不好）時,，都會選擇一種處理方式——扔掉,！害怕他會傳染到其他的細(xì)胞，但是往往你們?nèi)拥舻氖?ldquo;受害者”,，而沒找到“真兇”,。

并不是所有的細(xì)胞污染都能用扔掉解決，也并不是所有的細(xì)胞污染都可以用同一種試劑解決,。

辨別細(xì)胞狀態(tài),，找到根源，“對癥下藥”才是關(guān)鍵,。

（1）細(xì)菌污染 

狀態(tài)：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形,，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,，對細(xì)胞生長影響明顯。 

解決方法： 

1.仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況,，是否在高壓滅菌時放氣時間和壓力足夠,！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染,，一定要檢查培養(yǎng)液是否存在渾濁現(xiàn)象,！ 

2.可在培養(yǎng)液或血清中加支原體預(yù)防劑，以及的細(xì)菌清除劑,。 

（2）霉菌及真菌污染 

狀態(tài)：肉眼觀察培養(yǎng)基,，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基顏色基本無變化,，不渾濁,，但是培養(yǎng)基中由絮狀漂浮物，顯微鏡下觀察,，若感染真菌可看到分叉細(xì)絲狀的結(jié)構(gòu)（不同種類結(jié)構(gòu)不同）,，若感染霉菌，顯微鏡下可看到片狀的結(jié)構(gòu),，不透明,，真菌及霉菌對影響細(xì)胞的生長影響不大。 

解決方法： 

1.保證細(xì)胞房的干凈整潔,，干燥的環(huán)境(潮濕的環(huán)境利于霉菌及真菌的生長),。 

2.控制外來人員進(jìn)出實驗室,。 

3.對實驗室及培養(yǎng)箱進(jìn)行*消毒，推薦使用專門針對細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的抑菌劑,。 

4.若細(xì)胞非常珍貴,，且不易獲得，可以對污染的細(xì)胞采取如下操作,。 

懸浮細(xì)胞：收集細(xì)胞并離心,，用PBS漂洗，重復(fù)此操作數(shù)次,。貼壁細(xì)胞：用PBS輕輕沖洗細(xì)胞,，重復(fù)此操作數(shù)次。加入殺滅真菌

（3）支原體感染 

狀態(tài)：顯微鏡下很難捕捉,，培養(yǎng)液一般不會渾濁,，國內(nèi)血清很多沒做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一,。而且它不能用過濾的辦法除去,。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯,，只是生長緩慢,，直至慢慢凋亡。 

解決方法： 

>>預(yù)防：實驗室新購買的血清及培養(yǎng)基需檢測是否含有支原體,，引進(jìn)的新品種細(xì)胞需做支原體檢測,，向培養(yǎng)基中添加支原體預(yù)防劑。 

>>補救：將支原體去除劑與*培養(yǎng)液按1:800～1000比例稀釋,，加入細(xì)胞正常培養(yǎng),；并根據(jù)細(xì)胞污染的嚴(yán)重程度，處理3～6次即可*清除細(xì)胞支原體污染問題,。 

（4）黑膠蟲污染 

狀態(tài)：可以穿透濾膜,，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀,，高倍鏡下可看見黑色的小蟲游來游去,，培養(yǎng)液不渾濁，一般不會太影響,，細(xì)胞還可以用,。常常可在同一批號的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,。

解決方法：

加入黑膠蟲去除劑,，改變培養(yǎng)基的品牌。血清凍融采取逐級凍融等方法,。

（5）桿菌污染

狀態(tài)：類芽孢桿菌（Paenibacillus Ash,Priest&Collin,1994）呈桿狀,，革蘭氏染色陽性,、陰性或可變，以周生鞭毛運動,。當(dāng)細(xì)胞出現(xiàn)類芽孢桿菌污染,，會在顯微鏡下看到一些桿狀游動的小蟲子.

解決方法：

a. 發(fā)現(xiàn)細(xì)胞有桿菌污染，棄掉培養(yǎng)基,，用PBS清洗3遍,；

b. 然后按1:2000 比例加入類芽孢桿菌去除劑，即：邊加邊搖勻,；

c. 每天處理一次,，類芽孢桿菌去除劑連續(xù)處理3-4天，即可*清除桿菌污染,。

除以上污染源外,，配液消毒問題、操作問題也是污染原因之一,。關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況,，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37℃試培養(yǎng)一段時間后觀察,，如果沒有細(xì)菌生長就是操作及細(xì)胞培養(yǎng)箱環(huán)境的問題,。 

★CQ★TIPs：細(xì)胞操作及細(xì)胞培養(yǎng)箱環(huán)境問題如何解決？ 

1,、提高細(xì)胞操作技巧,，禁止交叉使用槍頭，在酒精燈火焰5公分距離內(nèi)操作,。 

2,、定期對細(xì)胞培養(yǎng)箱消毒，培養(yǎng)箱水盤中的水也要定期更換,，并使用無菌水,。 

3、進(jìn)入細(xì)胞房之前及在無菌操作臺操作細(xì)胞實驗之前需使用紫外燈照射30min,。定期使用細(xì)胞房除菌劑對細(xì)胞房空間進(jìn)行處理,。

4、每次開培養(yǎng)箱之前需用酒精消毒雙手,。 

5,、用培養(yǎng)箱除菌劑和水盤抑菌劑定期對培養(yǎng)箱進(jìn)行消毒。 

6,、配制的培養(yǎng)基需驗證無菌后方可進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。