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HCT-8/FU細(xì)胞- HCT-8/FU耐藥株培養(yǎng)方法

時(shí)間:2017-4-12閱讀:1319

一.貼壁細(xì)胞  
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部,。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張),。
顯微鏡觀察細(xì)胞,,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理,。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無(wú)菌操作,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞),。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,,加入終止液終止,。 
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞,。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。 
二.懸浮細(xì)胞 
1. 接收到細(xì)胞,,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的)培養(yǎng)瓶外部,。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無(wú)菌操作,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,,重懸細(xì)胞,。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,,37℃,5%CO2  培養(yǎng)。
三.一毫升小管操作方法  小管內(nèi)也是此細(xì)胞,。 
1. 用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的),。
2. 嚴(yán)格無(wú)菌操作,用吸管吸出管中細(xì)胞至9ml*培養(yǎng)基混勻,。
3. 1000rpm,5min離心,,重懸細(xì)胞。 
4.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,37℃,5%CO2  培養(yǎng),。

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