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人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株,,HCT8 V細(xì)胞
HCT8 V 貼壁上皮細(xì)胞
(2)客戶自備試劑
1)PBS
2)RPMI-1640培養(yǎng)基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
3)0.25% (W/V)胰蛋白酶(含0.02% EDTA)
人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株,HCT8 V細(xì)胞(3)細(xì)胞背景
1)生長(zhǎng)方式:貼壁
2)種屬:Homo sapiens 人
(4)培養(yǎng)條件
1)培養(yǎng)基:RPMI-1640培養(yǎng)基(不含Hepes)+ 10%胎牛血清+ 1%雙抗
2)溫度:37.0°C
3)氣體:空氣 95%,,CO2 5%
(5)培養(yǎng)方法
收到細(xì)胞后,,在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況:
如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿,用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi),,嚴(yán)格無菌操作,,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶,留10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿(達(dá)80-90%),。即可進(jìn)行傳代,,具體步驟如下:
1)棄去培養(yǎng)液,用PBS洗1-2次,。
2)向瓶?jī)?nèi)加入1.0-2.0ml胰蛋白酶液,,在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓,,迅速拿回操作臺(tái),,吸取胰蛋白酶,加含有6ml 含10%血清的培養(yǎng)液,,輕輕吹打細(xì)胞,。
3)加入等量的的培養(yǎng)液,輕輕吹打混勻后吸出一半,,分到新的培養(yǎng)
4)傳代比例:1:2-1:3
人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株,,HCT8 V細(xì)胞(6)常見問題及解決方案
1)培養(yǎng)瓶有破裂,培養(yǎng)液有漏液:細(xì)胞極大可能會(huì)污染,,所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決,。
2)細(xì)胞漂浮:培養(yǎng)瓶不開封,,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。次日觀察,如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,,表明細(xì)胞活力正常,,剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉,留10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,,細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度80%,,進(jìn)行消化傳代;如細(xì)胞還是不貼壁,,將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,,原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng),中間注意觀察,,我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo),,直到問題解決。
細(xì)胞分離,、培養(yǎng),、鑒定:
(1)從中國(guó)正常人、中國(guó)病人,、小鼠,、大鼠,、兔、豬,、牛等等組織中對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行分離,、培養(yǎng)、鑒定:我們將以客戶要求為標(biāo)準(zhǔn),,提供多種屬如中國(guó)正常人,、中國(guó)病人、小鼠,、大鼠,、兔、豬,、牛,、其它動(dòng)物原代細(xì)胞的分離、培養(yǎng),、鑒定,,并提供相應(yīng)的文件、資料,、數(shù)據(jù)和檢測(cè)證書,。對(duì)于人源性細(xì)胞,必要時(shí),,在許可的條件下,,我們盡可能的滿足客戶所提供的要求。
(2)從建立實(shí)驗(yàn)性疾病動(dòng)物(小鼠,、大鼠,、兔)模型體內(nèi)組織中對(duì)人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株,HCT8 V細(xì)胞進(jìn)行分離,、培養(yǎng),、鑒定: 我們將以客戶要求,建立標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)性疾病動(dòng)物模型,,或客戶提供實(shí)驗(yàn)性疾病動(dòng)物模型,,對(duì)原代細(xì)胞進(jìn)行分離,、培養(yǎng),、鑒定,并提供相應(yīng)的文件,、資料,、數(shù)據(jù)和檢測(cè)證書。
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