不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細胞層,，只要能移動了,，多半呈沙壯移動，其實已經可以了,，很多人喜歡把細胞消化或者吹打成*分離細胞,，這是沒有必要的。一般能移動了,，說明細胞與培養(yǎng)基質材料的附著已經消失了,，細胞之間的附著也已經消失了，細胞已經獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）,。這個時候應該停止消化,，不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好，間隙很大,，才停止,。細胞就是*成單個細胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集,，這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,，尤其是腫瘤細胞的一個特性，無論死活的細胞都是如此,，你可以嘗試,，準備100%的單個細胞懸液，貼壁后觀察細胞,，仍然是幾個幾個細胞聚集在一起,。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此，容易聚集,，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液（不要笑,，這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開）,。細胞只要能從基質上脫離下來,，這個時候即使是成片的（比如Calu-3細胞），吹打不超過20次后（一般10次即可）,，成小規(guī)模聚集（10個細胞左右）,，是正常的，不要試圖再去延長消化時間,，或者象有的同學那樣吹打1h,，等待單細胞懸液出現(xiàn)。