無論是原代培養(yǎng)還是細胞系的傳代培養(yǎng),，一旦培養(yǎng)開始,，就要定期更換或補充培養(yǎng)基。如果細胞持續(xù)增殖,，隨后遲早要進行傳代培養(yǎng),。對干不增殖的培養(yǎng)物，也需要定期更換培養(yǎng)基,，因為細胞仍會代謝,，培養(yǎng)基的某些成分會耗盡或自然降解，產(chǎn)生的代謝廢物也需要通過換液去除,。
細胞傳代間隔在不同細胞系中因生長速率和新陳代謝的不同而不同,。快速生長的轉(zhuǎn)化細胞系,，如 HeLa細胞系,，通常每周傳代一次，四天后換液,。生長緩慢的細胞系,，特別是非轉(zhuǎn)化的細胞系，可能每兩周,、三周甚至四周傳代一次,，兩次傳代之間每周換液。

有四個指標表示需要更換培養(yǎng)基:
01.pH降低時
pH降低,，要考慮pH降低的速率和確切值,。當pH從7.0降至6.5，大多數(shù)細胞停止生長,；在pH6.5和6.0之間,，細胞開始失去活性。如果培養(yǎng)基從紅色變成橙色,，再變成黃色,，那么需要更換培養(yǎng)基。盡量估計pH降低的速率,；如果pH為7.0的培養(yǎng)物每天降低0.1pH單位,，那么在換液前多放置一兩天沒什么傷害,，但若培養(yǎng)物每天降低0.4pH單位，則需在24～48h 內(nèi)換液,，不可不換液而放置過周末,。
02.細胞濃度
細胞濃度，細胞以高濃度培養(yǎng)比以低濃度培養(yǎng)更快地消耗培養(yǎng)基,，pH變化速率能夠證明這一點,。但也不總是如此，部分代謝較快的細胞密度低時也很容易使培養(yǎng)基很快變黃,，也有代謝慢的細胞密度非常高了可能才會變黃,。
03.細胞類型
細胞類型，正常細胞（例如二倍體成纖維細胞）通常在高密度時停止分裂,，這一現(xiàn)象是由于細胞擁擠,，生長因子耗盡及其他一些因素造成的。細胞停滯在細胞周期的G1期,，即使放置2～3周甚至更長時間,，細胞也很少變性。然而,，轉(zhuǎn)化細胞,、連續(xù)細胞系以及一些胚胎細胞在細胞密度過高時迅速變性，除非每天換液或傳代,。
04.形態(tài)衰退
形態(tài)衰退,，這點需通過定期觀察和熟悉細胞系來預(yù)計。如果任其退化發(fā)展下去,，它將成為不可逆的,，細胞將會進入凋亡,。
通常培養(yǎng)基的體積與表面積比是0.2～0.5mL/cm2,。其上限由通過液體層的氣體擴散所決定，而最適比例由該細胞的需氧量決定,，需氧量高的細胞在軟淺的培養(yǎng)基中生長較好（如2mm）,，而需氧量較低的細胞在較深的培養(yǎng)基中生長較好（如5mm）。如果培養(yǎng)基的深度大于5mm,，氣體擴散會受到限制,。對于單層培養(yǎng)物，這一問題可通過搖晃培養(yǎng)瓶,，或以培養(yǎng)基灌注培養(yǎng)物并在一中間儲存器中進行氣體交換來解決,。
更換培養(yǎng)液時，即使細胞密度很高,，也常伴隨細胞有絲分裂的激活,。不需要激活有絲分裂時可使用維持培養(yǎng)基,，維持培養(yǎng)基是將常規(guī)培養(yǎng)基血清濃度降至0.5%或2%或去除，因為低血清培養(yǎng)基中降低了生長因子和其他絲裂原,，所以細胞增殖活性會下降,。但轉(zhuǎn)化細胞系不適宜做這種處理，他們會繼續(xù)生長或者可能變性,，因為轉(zhuǎn)化細胞不會被調(diào)控在細胞周期的G1期停滯,。