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固相載體在ELISA測(cè)定過(guò)程中作為吸附劑和容器,,不參與化學(xué)反應(yīng)??勺鱁LISA中載體的材料很多,,*常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的性能,,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍保留原來(lái)的免疫學(xué)活性,,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用,。聚苯乙烯為塑料,,可制成各種形式。
ELISA載體的形狀主要有三種:微量滴定板,、小珠和小試管,。以微量滴定板最為常用,專(zhuān)用于EILSA的產(chǎn)品稱(chēng)為ELISA板,,上標(biāo)準(zhǔn)的微量滴定板為8×12的96孔式,。為便于作少量標(biāo)本的檢測(cè),有制成8聯(lián)孔條或12聯(lián)孔條的,,放入座架后,,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),,并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動(dòng)化儀器用于微量滴定板型的ELISA檢測(cè),包括加樣,、洗滌,、保溫、比色等步驟,,對(duì)操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利,。聚苯乙烯經(jīng)射線(xiàn)照射后,其吸附性能特別是對(duì)免疫球蛋白的吸附性能增加,,應(yīng)用于雙抗體夾心法可使固相上抗體量增多,,但用于間接法測(cè)抗體時(shí)空白值較大。
良好的ELISA板應(yīng)該是吸附性能好,,空白值低,,孔底透明度高,,各板之間、同一板各孔之間,、同一板各孔之間性能相近,。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大,,因此,,每一批號(hào)的ELISA板在使用前須事先檢查其性能,。
常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔,,洗滌后每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋度的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,,加底物顯色,,終止酶反應(yīng)后,分別測(cè)每孔溶液的吸光度,??刂品磻?yīng)條件,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右,。計(jì)算全部讀數(shù)的平均值,。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%,。
與聚苯乙烯類(lèi)似的塑料是聚氯乙烯,。作為ELISA固相載體,聚氯乙烯的特點(diǎn)為質(zhì)軟板薄,,可剪割,,價(jià)廉,但光潔度不如聚苯乙烯板,,孔底亦不如聚苯乙烯平整,。聚氯乙烯對(duì)蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高,。
為比較不同固相在某一ELISA測(cè)定中的優(yōu)劣,,可應(yīng)用如下的試驗(yàn):用其他免疫學(xué)測(cè)定方法選出一個(gè)典型的陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本,將它們進(jìn)行一系列稀釋后,,在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA操作步驟進(jìn)行測(cè)定,,然后比較結(jié)果。在哪一種載體上陽(yáng)性結(jié)果與陰性結(jié)果差別,,這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的最/合適的固相載體,。
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