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“黑膠蟲"可寄生于動物細胞,也可以生存于培養(yǎng)基中,,依靠細胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生,,并隨細胞傳代而傳代??梢姟昂谀z蟲"是一種異養(yǎng)生物,。我們在細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑膠蟲后污染怎么辦?下面有幾個處理建議,,我們一起來了解下吧!
1.換好一點的血清,,這樣可以有效減少“小黑點"的形成,。一般的血清都不要去滅活處理,為什么呢,?
因為經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,,或*沒有任何作用,,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低,。而經(jīng)過熱滅活的血清,,沉淀物的形成會顯著增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,,像是“小黑點",,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,,又會使此沉淀物更增多,,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。除非是在做免疫學研究或培養(yǎng)干細胞,、昆蟲細胞和平滑肌細胞時,,才推薦做熱滅活。所以在不是做免疫學研究或培養(yǎng)干細胞,、昆蟲細胞和平滑肌細胞培養(yǎng)時,,血清盡量不經(jīng)熱滅活。
2.如果是貼壁細胞的話,,可用無菌的PBS洗幾次,,可一定程度上緩解,。若是懸浮的話,就不太好處理拉,,可以向其中少加一點滋養(yǎng)細胞,。加滋養(yǎng)細胞對有黑膠蟲的剛復蘇的細胞很有效!還有就是實驗環(huán)境要注意好,,保持細胞間整個環(huán)境的潔凈度,。如果細胞不是非常珍貴,可以用伯氨奎,、磺胺,、四環(huán)素、貝尼爾,,也有建議慶大霉素500ug/ml洗滌,。
3.換用好的一次性塑料培養(yǎng)瓶。
4.停止復蘇,,停止養(yǎng)細胞,,*消毒所有用于細胞培養(yǎng)的一切用品,包括所用的培養(yǎng)瓶,,培養(yǎng)基,,吸管,胰酶,,孵箱,,超凈臺、空間等等你能想到的和細胞培養(yǎng)相關的所有物品,。一個星期后,,再復蘇污染之前凍存的細胞,注意你的白大衣衣袖污染即可,。這樣你可能覺得動作太大,,但可以用一個星期的時間挽救兩個月的時間,還有其他你為了找到污染源,,去除污染所耗費的精力,,和財力。
5.在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打,,沖洗干凈后再加入培養(yǎng)液,,堅持天天洗,傳代時加生理鹽水再離心一次,,接種密度稍大一些,,一段時間后,蟲子就會大大減少,對細胞的生長也不會有大的影響,。
所有東西最好重配,;如果實在要搶救,重點突破,,留幾瓶污染不是很嚴重的細胞搶救,,其余棄去
6.如果有其它可用的細胞,那么污染的細胞最好扔掉,;如沒有,,可試著用抗生素,可靠的是細菌培養(yǎng)加藥敏,,據(jù)藥敏結果選擇抗生素,,當然不能影響到細胞的狀態(tài)。
7.有材料稱minocycline具有一定的作用,,可以和換液結合起來使用,。
由于黑膠蟲尚未明確鑒定出是什么生物,所以上述的處理方法不一定正確,,可以供考慮采用,。
8.有人為尋找到殺滅“黑膠蟲"的方法,做了一個試驗,,他取有“黑膠蟲"污染的六孔板,,每孔內(nèi)有2ml培養(yǎng)液,,向有污染的孔內(nèi)分別加入0.5ml,、1ml、2ml,、3ml的新潔爾滅原液,,邊加邊在倒置顯微鏡下觀察。最后他得出結論:新潔爾滅與水或培養(yǎng)基的比例為1:4時即可殺死“黑膠蟲",。但是新潔爾滅對細胞的負面影響太大,,比較珍貴的細胞培養(yǎng)最好不采用此方法。
在細胞培養(yǎng)實驗中,,人們遇到的黒膠蟲并不都是一樣的,,有像細菌的、有像支原體的,、有像原蟲的,、有像真菌的,還有像細胞碎片的,。在國內(nèi)個實驗室的器材條件參差不齊,,而且實驗人員的操作質(zhì)量也不盡相同,同一種現(xiàn)象也可能有些許差異,當用描述出來的現(xiàn)象的差異可能變大也可能變小,。所以很多人看到細胞被細菌污染了,,不好處理,而卻描述出來的現(xiàn)象和流傳的黑膠蟲類似,,就會把培養(yǎng)失敗的原因歸結到無法處理的黒膠蟲污染,,甚至可能說它發(fā)現(xiàn)的是真正的黑膠蟲。這樣的事情多了,,黑膠蟲就會人為的變種,,像什么的都有。黑膠蟲是否存在,,還有待于科學的發(fā)展,。但有一點可以肯定的,大部分人發(fā)現(xiàn)的“黒膠蟲"并不是真正那個未知的黒膠蟲,,而是不很常見的細菌,、真菌、原蟲等微生物污染,。
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