原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機(jī)械法或生長法使細(xì)胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來,，并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長,。

原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟：

1)整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進(jìn)行,，所有的器材要高壓消毒,。

2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊ba比妥鈉麻醉,；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi),，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕,，后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上,。

3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖,，同時在右心耳處剪開一個小口,，緩慢推動注射器，隨著心臟的跳動,，將體內(nèi)的血液沖洗出來,。

4)取出小鼠的肺部組織，將肺組織切成小米粒樣的大小,，置于預(yù)冷的HBSS中反復(fù)沖洗幾次,。

5)將小米粒大小的肺組織置于培養(yǎng)瓶中（培養(yǎng)瓶前一天用1%明膠溶液包被培養(yǎng)面,，4度過夜，小鼠處理前,，將培養(yǎng)瓶放置培養(yǎng)箱中,，使其溫度恢復(fù)至37度），置于培養(yǎng)箱37度的環(huán)境下,，消化4個小時,。

6)消化4小時后，加入培養(yǎng)基（添加培養(yǎng)基,，可以是正常培養(yǎng)時的2倍量）,，繼續(xù)培養(yǎng)24小時（繼續(xù)培養(yǎng)的時間可根據(jù)細(xì)胞貼壁情況適當(dāng)調(diào)整）。

7)24小時后,，取出肺組織，鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),，換液,。

8)原代細(xì)胞的提取和培養(yǎng)是很慢的過程，一般需等到24小時后,，才能在鏡下看到些許細(xì)胞群,，一周到兩周后才會看到鵝卵石樣的排列情況。

9)原代細(xì)胞2-3天換液一次,，因為內(nèi)皮細(xì)胞生長形成單層時,，會出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象。所以,，內(nèi)皮細(xì)胞生長接近單層時就可以傳代了,，不要等到長得非常滿。