胎牛血清通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長(zhǎng)培養(yǎng)基的添加劑，在細(xì)胞培養(yǎng)中,，血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白,，低分子量營(yíng)養(yǎng)物，疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長(zhǎng)必要的成分如激素和粘附因子,。同時(shí),，胎牛血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分，起到保護(hù)細(xì)胞的作用,。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清,，主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分，培養(yǎng)細(xì)胞的類型和培養(yǎng)體系而定,。

血清實(shí)驗(yàn)中常見的問題解析：

一,、 如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損？

將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。

長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存在2-8℃時(shí)，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素,、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲(chǔ)存血清,，并避免反復(fù)凍融,。

建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),，請(qǐng)勿超過一個(gè)月,。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),，再放回冷凍,。

二、血清中包含絮狀沉淀,，它們是什么,，怎么處理？

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白,。這是正常特性,，不會(huì)影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,，離心血清(400g,，1-2分鐘)或者簡(jiǎn)單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,，因?yàn)槌恋頃?huì)堵塞濾膜而無法過濾),。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會(huì)再溶解。所以,，使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,，沉淀會(huì)自然消失。

三,、 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,，可長(zhǎng)期保存嗎？

一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí),，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它,。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。

四,、 為什么要熱滅活血清,？

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué) 研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清,。

五、 有必要做熱滅活嗎,？

實(shí)驗(yàn)顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn),，或*沒有任何作用，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低,。

而經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物 的分裂擴(kuò)增,。

非必須,，可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時(shí)間,，更確保血清的質(zhì)量!

六,、細(xì)胞培養(yǎng) 中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理,？

一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,，然后,，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng),。如果細(xì)胞被污染,，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃,、變混濁,。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等,。

七,、小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項(xiàng),？

來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時(shí)候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛,。

組份與比例不同：兩者所含的促細(xì)胞生長(zhǎng)因子,、促貼附因子、激素及其他活性物質(zhì)等組份與比例不同,，用途與用法不同：某些細(xì)胞必需胎牛血清才能生長(zhǎng),，而有些細(xì)胞只需小牛血清即可，使用濃度不同,，一般在5%-10%,，有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意：血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃,，若存放在4℃不可超過一個(gè)月,。

解凍血清時(shí) ，應(yīng)先將血清至于2-8℃冰箱,，并經(jīng)常搖勻使之溶解,，然后至室溫放置使之升溫，絕對(duì)不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中,，如放在37℃解凍,，顏色加深，粘稠度也會(huì)增加,，血清在解凍和熱滅活后,，應(yīng)按用量分裝并于-20℃保存，避免反復(fù)凍融,。