第一種方法是連續(xù)適應/循序隔絕法,。通過一系列的血清還原步驟，使細胞適應無血清培養(yǎng)基,。這是優(yōu)先選用的方法,，且不對細胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。

連續(xù)適應/循序隔絕法——方法1

使原培養(yǎng)基內的細胞連續(xù)地經過以下幾個階段：

階段1：75%補加血清的培養(yǎng)基或25%無血清培養(yǎng)基

階段2：50%補加血清的培養(yǎng)基或50%無血清培養(yǎng)基

階段3：25%補加血清的培養(yǎng)基或75%無血清培養(yǎng)基

階段4:100%無血清培養(yǎng)基

連續(xù)適應/循序隔絕法——方法2

1,、以原培養(yǎng)基中的相同濃度,，將血清加入無血清培養(yǎng)基內。將細胞從含血清的原培養(yǎng)基轉移到加了血清的無血清培養(yǎng)基，此時應注意要提高新培養(yǎng)系統(tǒng)中的細胞密度,。讓細胞有一個適應過渡期,。

2、按照方法1,，緩慢地降低血清濃度,，使細胞在每個階段有適應的時間。

3,、一旦血清補加量降為0,，在用于進行分析或其他操作前，讓細胞培養(yǎng)物具有數個適應過渡期,。

另一種方法是直接適應。其中,，細胞直接從含血清培養(yǎng)基轉移到無血清培養(yǎng)基內,。將大量細胞直接轉移到無血清或無蛋白的新培養(yǎng)基內。細胞必須處于指數生長期中期,，且存活率>90%,。

每3到4天更換約50%的培養(yǎng)基,，以防止培養(yǎng)基變成酸性,。維持高于正常值的細胞培養(yǎng)密度，直至培養(yǎng)的細胞需要每日更換培養(yǎng)基,。這時,，將細胞擴增到多個培養(yǎng)瓶內。

考慮建議

請在適應過程中,，細胞通常對PH和溫度變化較為敏感,。讓細胞在每個階段都至少有一個適應過渡期。

細胞存活率和細胞密度

細胞在對數生長期中期快速分裂,，且在適應過程開始時,，存活率大于90%。這一點至關重要,。當細胞需傳代時,，建議采用1:2或1:3的小傳代比例，以維持更高的細胞密度,，同時提供隔絕期間可能有助于細胞的細胞生長因子,。當細胞適應新的培養(yǎng)條件時，在增大細胞傳代密度,。

細胞生長

如果在適應過程中,，細胞停止了生長，則需讓細胞有更多的時間來適應培養(yǎng)基組合。例如,，在方法1的階段4,，向無血清培養(yǎng)基添加少量的血清(1-3%)。這樣有助于細胞更容易地適應新的培養(yǎng)基,。然后,，在幾個過渡期內，緩慢地減少血清量,，直至學清量為0,。

懸浮培養(yǎng)物

Meiatech公司的無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基不含血清中所發(fā)現的細胞附著延伸影子。在一段過渡期內,，貼壁細胞將開始離開表面,，并成為懸浮細胞系開始生長。細胞也可能因適應而發(fā)生形態(tài)變化,。監(jiān)測細胞的生長速度,，只要細胞能夠與新系統(tǒng)相融合，任何形態(tài)變化都不重要,。

細胞叢

在適應于無血清培養(yǎng)期間,，細胞容易形成叢。傳代培養(yǎng)時,，將叢輕輕折斷,，使其分散開。將培養(yǎng)物從靜止細胞培養(yǎng)瓶內轉移到可旋轉錐形瓶內,，這樣可能會有助于防止細胞叢的形成,。

抗生素

由于血清蛋白易于粘合到抗生素上，因此,，不建議在無血清適應過程中使用抗生素,。如不存在血清蛋白，則抗生素水平可能會對細胞產生毒性,。

預防措施

確保在開始適應過程前,，儲存有大量原培養(yǎng)基的細胞。如果細胞沒有存活到下一階段,，則在整個過程中保存每一階段使用的培養(yǎng)瓶,。