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蒂科(上海)生物科技有限公司

使用胰酶時,有哪些注意事項

時間:2021-12-24閱讀:2294

胰酶的作用原理是什么呢,?

胰酶是一種蛋白酶,,酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈,,通過在特定位置上降解蛋白,使細胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解,,從而使兩者分離,。這時細胞在自身內(nèi)部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。

 使用胰酶時需注意哪些細節(jié)問題,?

在使用胰酶(Trypsins)細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染,。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差,,做流式時的CD Marker也可能會下降,。胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶,并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則,。因為冷凍保存時液體體積會膨脹,,多次使用同一瓶胰酶反復凍融會降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細胞,,如胚胎,、上皮、肝,、腎等組織,但對于纖維性組織和較硬的癌組織效果較差,。胰酶消化效果主要與pH值,、溫度、胰酶濃度,、組織塊大小和硬度有關(guān),。

注意:不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才表示消化好了。

一般肉眼觀察貼壁細胞層,,只要能移動了,,多半呈沙狀移動就可以了,這時就應(yīng)該停止消化,。

如何選擇正確的細胞消化試劑,?


BI提供動物來源的傳統(tǒng)胰酶及基因工程生產(chǎn)的重組胰蛋白酶。
動物胰酶普遍用于血清培養(yǎng),,不同的細胞加入胰酶的成分和濃度不一樣,。貼壁不牢和半貼壁細胞盡量使用濃度0.05%不含EDTA的胰酶且不需要放在培養(yǎng)箱孵育,這樣易于控制,,對細胞的傷害也降低,。對于難消化的細胞就需要使用含EDTA的0.25%的胰酶,而不是無限地延長消化時間,。重組胰酶用于無血清培養(yǎng),。重組胰酶具有與動物源性胰蛋白酶相同的酶學性質(zhì),,但是不含任何動物源成分,可替代胰蛋白酶使用(常用于細胞治療),。

EDTA和胰蛋白酶各有什么作用呢,?

許多人不用胰蛋白酶,只用EDTA,,或者用胰蛋白酶/EDTA聯(lián)合作用,。胰酶切割ECM(負責粘連和附著的蛋白),而EDTA通過螯合Ca2+,,抑制Integrin的貼壁活性,,所以EDTA的作用更加溫和。



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