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市場(chǎng)上的胎牛血清種類(lèi)繁多,,魚(yú)龍混雜,,很多科研工作者,,特別是剛接觸細(xì)胞培養(yǎng)的人,,難以分辨胎牛血清質(zhì)量的優(yōu)劣。選購(gòu)胎牛血清請(qǐng)注意以下幾點(diǎn):
一,、外觀
拿到胎牛血清,,最先接觸的是血清外觀,對(duì)于缺少細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)的人來(lái)說(shuō),,外觀的判斷尤為重要
1,、顏色
根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,,我國(guó)的細(xì)胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl,,實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對(duì)血清并無(wú)直接影響,,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過(guò)程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度,,良好的操作能降低血清的溶血。
國(guó)產(chǎn)血清的采血點(diǎn)很分散,,大多是由屠戶(hù)采血后馬上離心收集,,所以很少會(huì)有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,,當(dāng)然,,國(guó)產(chǎn)血清也很少有標(biāo)準(zhǔn)意義上的胎牛血清。
進(jìn)口胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,,因?yàn)檎嬲奶ヅQ迥δ懿?,紅細(xì)胞容易破裂。
2,、沉淀
很多血清客戶(hù),,會(huì)發(fā)現(xiàn)進(jìn)口血清有沉淀,從而懷疑血清的質(zhì)量問(wèn)題,,這是沒(méi)有根據(jù)的,。
血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對(duì)血清質(zhì)量沒(méi)有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,,和廠家的加工生產(chǎn)方式密切相關(guān),。
國(guó)產(chǎn)的血清,大多來(lái)自北方,,由于價(jià)格低廉,,保存環(huán)境都不好,從采血,、冷凍,、運(yùn)輸?shù)缴a(chǎn)會(huì)經(jīng)過(guò)多次凍融,,每次凍融過(guò)程,,就會(huì)析出部分纖維蛋白沉淀,這樣,,血清成品過(guò)濾后看起來(lái)反而更加的“干凈",,很少有沉淀產(chǎn)生。
進(jìn)口的胎牛血清,,過(guò)濾分裝前很少會(huì)反復(fù)凍融,,生產(chǎn)后的成品也是清澈的,但隨著時(shí)間的推移,,血清中的大量纖維蛋白會(huì)析出形成沉淀,。當(dāng)然,進(jìn)口的新生牛血清,,一般牛齡都在2周左右,,血清中的各種蛋白含量明顯偏高,生產(chǎn)后血清可能會(huì)渾濁,,甚至有大量沉淀,。
當(dāng)然,購(gòu)買(mǎi)回來(lái)的血清都是冰凍狀態(tài),,使用時(shí)需要融化,,融化過(guò)程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進(jìn)行,否則沉淀相對(duì)較多,,雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,,但對(duì)細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。
3,、澄清度
進(jìn)口胎牛血清由于蛋白和脂類(lèi)等物質(zhì)含量低,,表現(xiàn)為稀薄、清淡,,而國(guó)產(chǎn)血清,,因?yàn)榻^大多數(shù)是新生牛血清,相對(duì)而言更加粘稠,,顏色略深,,這對(duì)于初步接觸血清的人很難判斷,,但把兩者進(jìn)行對(duì)比,可容易分辨,。
二,、主要技術(shù)指標(biāo)
目前國(guó)內(nèi)血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是2005版的《中華人民共和國(guó)藥典》,主要指標(biāo)有以下幾點(diǎn):
1,、內(nèi)毒素
標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml,。內(nèi)毒素是細(xì)菌破碎后細(xì)胞壁的成分,因此內(nèi)毒素含量的高低可表現(xiàn)出采血到生產(chǎn)一系列過(guò)程中的無(wú)菌操作情況,。
2,、總蛋白含量
胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,,說(shuō)明采血的牛齡偏大,,不是胎牛,數(shù)值偏低,,表明血清可能摻水了,。
3、血紅蛋白
標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl,,顏色越紅,,數(shù)值越高,反之,,數(shù)值越低,。
4、pH
國(guó)產(chǎn)血清,,大多高于7.5,,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,,具體原因未知,,可能和牛齡有關(guān),這也能用來(lái)初步鑒別血清的來(lái)源,。
5,、微生物
包括細(xì)菌、霉菌,、支原體,、噬菌體、各類(lèi)病原性病毒等,。隨著國(guó)內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,,細(xì)菌、霉菌等“大型"微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過(guò)0.1um過(guò)濾,,大多也能清除,。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴(yán)重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過(guò)程中帶入,,又無(wú)法過(guò)濾,,很難*清除,但對(duì)血清質(zhì)量影響不大,。病原性病毒,,特別是BVDV,在國(guó)產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,,這類(lèi)微生物是影響國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量的重要因素之一,,而進(jìn)口胎牛血清中基本都控制的很好。
6,、免疫球蛋白
國(guó)產(chǎn)血清的只是定性檢測(cè),,結(jié)果也很不準(zhǔn)確,,進(jìn)口胎牛血清大多定量檢測(cè),。免疫球蛋白的數(shù)值能*體現(xiàn)出采血的時(shí)的牛齡情況,國(guó)產(chǎn)血清,,基本都是新生牛的,,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,,進(jìn)口胎牛血清,,不含IgM,IgG的含量也較低,。
7,、其它
不管是國(guó)產(chǎn)還是進(jìn)口血清,都是不測(cè)抗生素的(無(wú)四環(huán)素胎牛血清除外),。國(guó)外,,抗生素的使用很?chē)?yán)格,用量也很少,,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,,因此可以做到胎牛血清中不含抗生素或含量極低;國(guó)內(nèi),,抗生素的濫用已成了普遍現(xiàn)象,,血清中殘留很高,對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)極為不利,,這是國(guó)產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因,。
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