143B細(xì)胞人骨肉瘤細(xì)胞

時(shí)間：2020-6-8閱讀：1219

143B細(xì)胞人骨肉瘤細(xì)胞

細(xì)胞名稱	143B 人骨肉瘤細(xì)胞
貨號	H002
種屬	人
細(xì)胞來源	從ATCC/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)
生長特性	貼壁上皮樣
培養(yǎng)條件	培養(yǎng)基：90%DMEM(H)+10%FBS 溫度：37℃ 氣相：95%空氣，5%二氧化碳
傳代	1.用75%酒精噴灑整個(gè)培養(yǎng)瓶消毒,，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時(shí)的緩沖,，.然后置于無菌操作臺,，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉,，再往其中加入5-6mL新鮮培養(yǎng)基(以T25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液,； 2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%,，需要對其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3到1:6,； 3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于37°預(yù)熱,，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml PBS,，輕晃洗滌后棄去,。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第D一次消化需時(shí)常取出置于顯微鏡下觀察,，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓,、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為D佳消化時(shí)間，記錄D佳消化時(shí)間,，以便于下次消化）,，消化好后加入3ml培養(yǎng)基終止消化,。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之脫落,，然后收集細(xì)胞懸液,，1200rpm離心3min，棄上清,，加入*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,，進(jìn)行傳代。
保存	凍存條件：80%*培養(yǎng)基+10%FBS+10%DMSO (備注：建議使用本公司的冷凍液（H-W-100）,，用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞,，不能預(yù)熱后使用。) 保存條件：液氮存儲
供應(yīng)限制	經(jīng)供研究之用
常見問題及解決方案	1.培養(yǎng)瓶有破裂,，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染,，所以我們會及時(shí)安排幫老師解決。 2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基,，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基,，請?jiān)谠颗囵B(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時(shí)間長不宜超過 72 小時(shí)） 3.細(xì)胞漂浮：培養(yǎng)瓶不開封,，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱,。1-2小時(shí)后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底,，表明細(xì)胞活力正常,，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察,，細(xì)胞生長至匯合度80%,，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁,，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶,，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察,，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo),，直到問題解決。

143B細(xì)胞人骨肉瘤細(xì)胞

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