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當前位置:蒂科(上海)生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>細胞需要注意的事項
1.一般客戶拿到細胞后,,應該注意什么,?
客戶收到細胞后先不開蓋,,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞后觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),,排除細胞本身污染的情況,;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞,。
收到細胞時如無異常情況,,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,,未超過80%匯合度時,,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng),。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液,、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶,。
細胞消化液建議使用PBS配制,,慎用Hanks液配制。
2.快遞細胞多久能到,,是寄凍存的細胞還是復蘇好的細胞,?
我們采用快遞發(fā)貨,一般外地2--3天,,寄細胞前請確認當?shù)販囟?,如果氣溫低?度的,則采用郵寄凍存細胞,。復蘇細胞一般是是個工作日
3.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,?
不能。
每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養(yǎng)基,,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,,細胞大都無法立即適應,造成細胞無法存活,。我們的細胞株所使用的培養(yǎng)液都是HAKATA公司干粉配制的,,均不含HEPES,所以我們建議您準備同樣條件的培養(yǎng)液用于細胞培養(yǎng),。Hyclone的培養(yǎng)液請慎用,,尤其是Hyclone液體原裝培養(yǎng)液。
4.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類,?
不能,。
血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響,。來自不同物種的血清,,在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活,。
5.培養(yǎng)基中血清的比例多少合適,?
血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,,不要低于5%或高過20%,,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡,。一般建議血清含量為10%,,可以適量加減。
6. 何時須更換培養(yǎng)基,?
視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換,。
7.購買的復蘇細胞,,為何會有脫落?
因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,,收到后可以離心收集。
8.購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形,?
研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,,造成細胞的物理性損傷,,以及細胞流失。建,議細胞解凍后不要立刻離心,,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。
9. 購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳,。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤,。冷凍細胞解凍后,,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞,。培養(yǎng)溫度使用錯誤,。細胞置于–80°C太久。
10. 收到的冷凍管瓶身破裂,,瓶蓋有裂紋,,或瓶蓋脫落之原因?
冷凍管瓶蓋裂紋,,或瓶身破裂,,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取,。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。
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