1.DMSO之等級(jí)和無菌過濾之方式為何,？
冷凍保存使用的DMSO等級(jí),，必須為Tissueculturegrade的DMSO(如SigmaD2650),，其本身即為無菌狀況,，*次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,，保存于4°C,，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì)，并可減少污染之機(jī)會(huì),。若要過濾DMSO,，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜。
 
2.冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C30-0分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80°C16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3°C至–80 °C以下，再放入液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20°C不可超過1小時(shí),，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡,，亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中,，惟存活率稍微降低一些。
 
3.細(xì)胞欲冷凍保存時(shí),，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度,？
冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106cells/mlvial，融合瘤細(xì)胞則以5x106cells/mlvial為宜,。
 
4. 應(yīng)如何避免細(xì)胞污染,？
細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌,、酵母菌、霉菌,、病毒和霉?jié){菌,。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室環(huán)境不佳,、污染之血清和污染之細(xì)胞等,。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境,、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法,。
 
5.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時(shí)，應(yīng)如何處理,？
直接滅菌后丟棄之,。
 
6.支原體(mycoplasma)污染的細(xì)胞，是否能以肉眼觀察出異狀,？
不能,。
除極有經(jīng)驗(yàn)之專家外，大多數(shù)遭受支原體污染的細(xì)胞株,，無法以其外觀分辨之,。
 
7.支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？
支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù),，代謝及研究之任一數(shù)據(jù),。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free,，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義,。
 
8.偵測(cè)出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)，該如何處理,？
直接滅菌后丟棄,，以避免污染其它細(xì)胞株。
 
9.CO2培養(yǎng)箱之水盤如何保持清潔,？
定期(至少每?jī)芍芤淮?以無菌蒸餾水或無菌去離子水更換之,。
 
10.為何培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色,，且pH值會(huì)越來越偏堿性,？
培養(yǎng)基保存于4°C冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會(huì)逐漸溢出,，造成培養(yǎng)基越來越偏堿性,。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenolred)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果,，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡,。若培養(yǎng)基偏堿時(shí),，可以通入無菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值,?；蚣尤胂←}酸調(diào)整PH值,。