什么是傳代細(xì)胞培養(yǎng),？

原代細(xì)胞或細(xì)胞株或細(xì)胞系需在體外持續(xù)地培養(yǎng)就必須傳代,，以便獲得穩(wěn)定的原代細(xì)胞或細(xì)胞株或細(xì)胞系或得到大量的同種細(xì)胞,，并維持細(xì)胞種的延續(xù),，這個過程體外培養(yǎng)稱為傳代細(xì)胞培養(yǎng),。一般認(rèn)為,，細(xì)胞培養(yǎng)形成單層匯合，細(xì)胞密度與生存空間有密切的關(guān)系,，將培養(yǎng)細(xì)胞分散,，以1:2或l:3或1:4以上的比率轉(zhuǎn)移分散進(jìn)行培養(yǎng)，即為傳代細(xì)胞培養(yǎng),。細(xì)胞傳代后,，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。

常用細(xì)胞分裂指數(shù)表示細(xì)胞增殖的旺盛程度,，即細(xì)胞群的分裂相數(shù)／100個細(xì)胞,。一般細(xì)胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細(xì)胞可達(dá)3～5％,。細(xì)胞接種2～3天分裂增殖旺盛,，是活力時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期),，適宜進(jìn)行各種試驗,。

一、傳代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

（1）吸除或倒掉原瓶中的舊培養(yǎng)基（以25mL培養(yǎng)瓶為例）,。

（2）每瓶加入2mL,無鈣,、鎂PBS，漂洗一次后倒掉,。

（3）每瓶加入1mL消化液（0.25%胰蛋白酶或0.02%EDTA或混合液）,，輕輕搖動培養(yǎng)瓶,，經(jīng)消化液鋪滿所有細(xì)胞表面,，待細(xì)胞層略有松動，肉眼可觀察到“薄膜”現(xiàn)象時,，倒掉消化液,，再繼續(xù)作用2~3分鐘，輕輕搖動,，細(xì)胞層可隨殘留的消化液呈片狀從瓶壁上脫落下來,，在顯微鏡下可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞回縮變圓，細(xì)胞間隙增大,，此時應(yīng)立即終止消化,。

（4）加入*培養(yǎng)基5mL，用吸管反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞,，吹打時要按順序進(jìn)行,，以確保所有瓶壁均吹打到，吹打時動作要輕柔,，不要用力過大,，盡可能不要出現(xiàn)泡沫，以避免細(xì)胞的機械損傷,。

（5）用計數(shù)板計數(shù),，計算細(xì)胞的濃度，并用培養(yǎng)基調(diào)整適當(dāng)?shù)募?xì)胞濃度后再分瓶培養(yǎng),。

二,、傳代細(xì)胞的建系和維持

1、細(xì)胞檔案

細(xì)胞檔案要記錄好，如組織來源,、生物學(xué)特性（由形態(tài),、生長繁殖曲線、染色體核型情況,、代謝特性,、分化特性、病毒敏感性,、致瘤特性,、有無支原體和潛存病毒等）、培養(yǎng)基的要求,、傳代換液時間,、擴增時間（分裂指數(shù)），細(xì)胞的特殊遺傳標(biāo)志（標(biāo)記染色體）等,，這些記錄對于保證細(xì)胞的正常生長,，保持細(xì)胞的一致和經(jīng)長期培養(yǎng)細(xì)胞特性的變異比較，都有十分重要的意義,。

2,、換液傳代

（1）細(xì)胞系的傳代、換液方法與前相同,，但一般都有自身的規(guī)律性,，因而在繼續(xù)傳代時，要注意保持其穩(wěn)定的規(guī)律性,，這樣可以減少由于傳代時細(xì)胞密度的頻繁增減或換液時間的不規(guī)律而導(dǎo)致細(xì)胞生長特性的改變,，給以后的實驗帶來影響。

（2）多種細(xì)胞系維持傳代,，要嚴(yán)格操作程序,，對所用的試劑各系不能交叉。每傳5代后,，細(xì)胞種子均應(yīng)凍存,。傳代時均應(yīng)作好記錄，培養(yǎng)瓶上要有明顯標(biāo)記,，標(biāo)記細(xì)胞系名稱和傳代的代數(shù)及傳代時間,。細(xì)胞種子的及時凍存不僅可防止污染丟失，而且還可防止因盲目傳代而造成細(xì)胞變異,，此外還可提供不同代次的細(xì)胞同時進(jìn)行對比試驗,。