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當(dāng)前位置:上海仁捷生物科技有限公司>>公司動態(tài)>>小鼠半胱氨酸蛋白酶1(Casp-1)ELISA試劑盒原理
英文名稱:Mouse Casp-1 ELISA Kit
實(shí)驗類型:夾心法
檢測范圍:1.5 pmol/L – 48 pmol/L
zui低檢測限:0.1 pmol/L
應(yīng)用范圍:血清,、血漿,、組織勻漿,、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體(本產(chǎn)品僅供實(shí)驗室科研及非臨床用途)
小鼠半胱氨酸蛋白酶1(Casp-1)ELISA試劑盒僅供研究使用
本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織,、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中小鼠半胱氨酸蛋白酶1(Casp-1)的含量,。
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),。往預(yù)先包被小鼠半胱氨酸蛋白酶1(Casp-1)捕獲抗體的包被微孔中,,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠半胱氨酸蛋白酶1(Casp-1)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),,計算樣品濃度。
試劑盒組成 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
---|---|---|---|
微孔酶標(biāo)板 | 8孔×12條 | 8孔×6條 | 無 |
標(biāo)準(zhǔn)品 | 0.3mL×6管 | 0.3mL×6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:48,、24,、12、6,、3,、0 pmol/L
2. 經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),,實(shí)驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗,。
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,;
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL,;空白孔不加。
4. 除空白孔外,,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),,靜置1min,,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板),。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,,37℃避光孵育15min,。
7. 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),,在450nm波長處測定各孔的OD值,。
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑,。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值,。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性,。
9. 不能使用過期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,,所有的樣品都應(yīng)管理好,,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,;在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙,,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用,。根據(jù)需要,,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板:如果有自動洗板機(jī),,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過程中,。
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),,在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,,計算出樣品的濃度,。
(此圖僅供參考)
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