人胰島素(INS)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒使用說明書

實驗原理 ：

本試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗 (ELISA) ,。往預先包被有人胰島素(INS) 捕獲抗體的微孔中， 依次加入樣本,、標準品,、生物素標記的檢測抗體,，HRP 酶結合物,，中間經(jīng)過溫育和洗滌，用底物 TMB 顯色,，TMB 在過氧化物酶(HRP)的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰島素  (INS) 呈正相關,。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度 (OD 值) ,，計算樣品濃度。

操作步驟 ：

1.  從室溫平衡 10 分鐘后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。

2.  加樣：分別將樣品或不同濃度標準品按照 100 μ l 每孔加入相應孔中，空白孔加入 100μL 通用稀釋液,。蓋 上封板膜后 37℃溫育 1 小時,。  (建議：將待測樣本用通用稀釋液稀釋 1 倍后再加入酶標板內測試。從 而減少基質效應對測試結果的誤差影響,，最后計算樣本濃度時需乘以對應的稀釋倍數(shù),。所有的待測樣本和 標準品在檢測中建議設立復孔) 。

3.  加生物素化抗體：取出酶標板，棄去液體,，不用洗滌。每孔直接加入生物素化抗體工作液 100 μL,，蓋上封 板膜后 37℃溫育 1 小時,。

4.  洗板：棄去液體，每孔加入 300 μL 1x 洗滌液,，靜置 1 分鐘,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復洗板

3 次 (也可用洗板機洗板) ,。

5.  加酶結合物工作液：每孔加入酶結合物工作液 100 μL，蓋上封板膜后 37℃溫育 30 分鐘,。

6.  洗板：棄去液體按步驟 4 洗滌方法,，洗板 5 次,。

7.  加底物：每孔加入底物(TMB)90 μL,，蓋上封板膜,，37℃避光溫育 15 分鐘,。

8.  加終止液：取出酶標板,，每孔直接加入終止液 50 μL,，立即在 450nm 波長處測定各孔的OD 值,。

結果判斷：

1.  計算標準品和樣本復孔的平均 OD 值并減去空白孔的OD 值作為校正值,。以濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,， 在雙對數(shù)坐標紙上繪出四參數(shù)邏輯函數(shù)的標準曲線(作圖時去掉空白組的值)。

2.  若樣品OD 值高于標準曲線上限,，應適當稀釋后重測并在計算樣本濃度時乘以相應的稀釋倍數(shù),。

典型數(shù)據(jù)和參考曲線：

以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實驗者需根據(jù)自己的實驗建立標準曲線,。

試劑盒性能 ：

1.  重復性：板內變異系數(shù)小于 10%,，板間變異系數(shù)小于 10%。

2.  回收率：在選取的健康人血清,、血漿和組織勻漿中加入 3 個不同濃度水平的人 INS,，計算回收率

3.  線性稀釋：分別在選取的 4 份健康人血清、血漿和組織勻漿中加入高濃度人 INS,，在標準曲線動力學范圍

內進行稀釋,，評估線性。評估線性,。

本試劑盒只能用于科學研究,，不得用于醫(yī)學診斷          6

注意事項：

1.  嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結果。所有試劑都必須在使用前達到室溫 20-25℃ ,。使用

后立即冷藏保存試劑,。

2.  洗板不正確可以導致不準確的結果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉,。

3.  消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD 值。

4.  底物顯色液應呈無色或很淺的顏色,，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。

5.  避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結果。

6.  在儲存和溫育時避免強光直接照射,。

7.  平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。

8.  任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑

的生物活性,。

9.  不能使用過期產(chǎn)品,。

10. 如果可能傳播疾病，所有的樣品都應管理好,，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。