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當(dāng)前位置:上海仁捷生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒血清,、血漿、細(xì)胞樣本的收集及處理方法
1,、血清:用無(wú)菌管收集,,室溫血液自然凝固10-20分鐘,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心,。
2,、血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑抗凝劑,混合10-20分鐘后,,2-8℃條件離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分),,仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,,應(yīng)該再次離心,。
4細(xì)胞樣品前處理:
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍,。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液,。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸,。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液,,再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞,。充分裂解后應(yīng)沒(méi)有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多,,必需分裝成50-100萬(wàn)細(xì)胞/管,,然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品: 把組織剪切成細(xì)小的碎片,。按照每20mg組織加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液,。 (如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,,可以適當(dāng)減少裂解液的用量),。
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解,。
2,、后處理:
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,,即可進(jìn)行后續(xù)的ELISA,、Western和免疫沉淀等操作。
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