實驗原理-大鼠白細胞介素13ELISA檢測試劑盒

試劑盒組成及試劑配制 

1. 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 

2. 標準品（Standard）：6瓶,。

3. 生物素標記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶,。

4. 辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶,。

5. 生物素標記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣根過氧化物酶標記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

6. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶,，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍,。 

8. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實驗原理

用純化的抗體包被微孔板,，制成固相載體，往包被抗C3抗體的微孔中依次加入標本或標準品,、生物素化的抗C3抗體,、HRP標記的親和素，經(jīng)過*洗滌后用底物TMB顯色,。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的C3呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),，計算樣品濃度。

標本的采集及保存

1. 血清：全血標本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑,，標本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

3. 細胞培養(yǎng)物上清或其它生物標本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測,，或?qū)吮痉庞?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4. 樣本處理：血清或血漿標本推薦稀釋10,000倍,。

注：以上標本置4℃保存應(yīng)小于1周,，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月,，-80℃不應(yīng)超過2個月,；標本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標本不宜進行此項檢測,。

實驗原理-大鼠白細胞介素13ELISA檢測試劑盒

ELISA試劑盒操作注意事項：

1）試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,，不可保存,。

2）實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存,，以免變質(zhì),。

3）不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。

4）使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A、B液時,，避免使用帶金屬部分的加樣器,。

5）使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。

6）洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。

7）底物A應(yīng)揮發(fā),，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,，避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸，有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。

8）加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。

9）按照說明書中標明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作