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葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測試盒微量法
測定意義:葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,,G6Pase,EC 3.1.3.9)廣泛存在于動物,、植物,、微生物和細(xì)胞中,,是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,,在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。
測定原理:G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖,,變旋酶和葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NAD+還原生成NADH,,在340nm下測定NADH生成速率,即可反映G6P活性,。
葡萄糖-6-磷酸酶(G6P)測試盒微量法
需要的儀器,耗材:分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、臺式離心機(jī),、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板,、研缽,、冰和蒸餾水。
樣本處理
1,、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),,離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個):提取 液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,, 功率 20%或 200W,超聲 3s,,間隔 10s,,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,,取上清,,置冰上待測。
2,、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,,加入 1mL 提取液), 進(jìn)行冰浴勻漿,。8000g 4℃離心 10min,,取上清,置冰上待測,。
3,、血清(漿)樣本:直接檢測。
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