人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

Cat.No. RJ-14611

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿,、組織勻漿,、細(xì)胞培養(yǎng)物上清及相關(guān)液體樣本中胰高血糖素樣肽1（GLP-1）的含量。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）水平,。用純化的人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）捕獲抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）,，再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人胰高血糖素樣肽1（GLP-1）含量。

試劑盒組成：

注：標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為：12,、6,、3、1.5,、0.75,、0 pmol/L.

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心,。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心,。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后,，稱取重量,。加入一定量的PBS，PH7.4,。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4）,，用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

• 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；,。
• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl，空白孔除外,。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
• 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
• 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

• 計算：

  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，    

  在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD      

  值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋      

  倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計算出標(biāo)      

  準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

  代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋      

  倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。                  

   

                                                

   

  （此圖僅供參考）

   

   

   

  試劑盒性能：

  1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上,。

  2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。

   

  檢測范圍：                                              

  0.375 pmol/L - 12 pmol/L

   

  靈敏度：                                              

  zui低檢測濃度小于0.1 pmol/L

   

  保存條件及有效期：

  1.試劑盒保存： 2-8℃,。

  2．有效期： 6個月

   

  
  Human ghcagons-like pepfide 1