大鼠胰島素（INS）酶聯(lián)免疫分析(ELISA)定量試劑盒

本試劑僅供研究使用       目的：本試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿,、組織勻漿,、細胞培養(yǎng)物上清及相關液體樣本中胰島素（INS）的含量,。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠胰島素（INS）水平,。用純化的大鼠胰島素（INS）捕獲抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被的微孔中依次加入大鼠胰島素（INS）,，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的大鼠胰島素（INS）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠胰島素（INS）含量,。

試劑盒組成：

注：標準品濃度依次為：48,、24、12,、6,、3,、0 mU/L.

操作步驟

1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL,；,。
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、待測樣品孔,。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。
3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl,，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復5次，拍干,。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
9. 測定：以空白孔調零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

注意事項：

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。
2. 濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。
3. 各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內，如標本數量多,，推薦使用排槍加樣,。
4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數（×n×5）,。
5. 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6. 底物請避光保存,。
7. 嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
8. 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9. 本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準,。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標，   

在坐標紙上繪出標準曲線,，根據樣品的OD     

值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋      

倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標     

準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值     

代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數,，即為樣品的實際濃度,。                 

（此圖僅供參考）

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% ,。

檢測范圍：                                              

1.5 mU/L - 48 mU/L

靈敏度：                                              

zui低檢測濃度小于0.1 mU/L

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存： 2-8℃,。

2．有效期： 6個月