僅供科研使用,，不得用于臨床檢驗(yàn)。

小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測(cè)試劑盒（ELISA）

說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測(cè)試劑盒（ELISA）

英文名稱：Mouse anti-hepatitis B virus surface antibody（HBsAb） ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

【預(yù)期用途】

僅供科研使用,，定性檢測(cè)血清,、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)。

【檢驗(yàn)原理】

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被人乙肝表面抗原（HBsAg）的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、陰性和陽性對(duì)照,、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測(cè)定吸光度（OD 值）,，判定陰陽性。

【主要組成成分】

主要成分

需要但未提供的材料及耗材

  1,、酶標(biāo)儀

2,、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4,、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)

5,、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7,、無粉一次性乳膠手套

【儲(chǔ)存條件及有效期】

  1,、2-8℃保存，切勿冷凍,，有效期6個(gè)月,。

  2,、開封使用后，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋,，并將全部試劑放回2-8℃冰箱。

  3,、開封后,，按照建議的條件保存，校準(zhǔn)品,、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,，有效期為14天，其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的,。

【適用儀器】

  半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,，如Thermo MK3，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀,。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南,。所有樣本采集過程中，不得使用疊氮鈉做為防腐劑,。

1,、細(xì)胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細(xì)胞顆粒和聚合物,，上清液保存在- 20℃以下,，避免反復(fù)凍融。

2,、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，4000rpm條件下離心20min,，小心地分離出血清,，保存在- 20℃以下，避免反復(fù)凍融,。

3,、血漿：肝素，EDTA,，或檸檬酸鈉作為抗凝劑,。在4000rpm條件下，離心20分鐘取上清,，血漿保存在-20℃以下,，避免反復(fù)凍融。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下,，可以儲(chǔ)存72h,，或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月,。樣本收集后,，不是一次檢測(cè)完,，請(qǐng)按一次用量分裝凍存，避免反復(fù)凍融,，使用時(shí)在室溫下解凍,，確保樣品均勻充分解凍。

【檢驗(yàn)方法】

試劑準(zhǔn)備

1,、使用前,，所有的組分都要至少復(fù)溫30min，確保充分復(fù)溫到室溫,。

2,、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液，會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生,，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解,。濃縮洗滌液與蒸餾水,，按1:20稀釋，即1份的濃縮洗滌液,，添加19份的蒸餾水,。

操作程序

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.   設(shè)置陰性對(duì)照孔,、陽性對(duì)照孔和樣本孔，陰性,、陽新對(duì)照孔各加50μL對(duì)照品,；
3.   樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加,。
4.   除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）,。
6.   每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.   每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測(cè)定各孔的OD值,。

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1. 陰性對(duì)照OD值：小于0.2。

2. 陽性對(duì)照OD值：大于0.8,。

3. 陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對(duì)照OD值+0.25,，樣本OD值大于閾值，判定為陽性,，反之,，為陰性。

【試驗(yàn)方法的局限性】

該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)小鼠血清,、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體,，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中,、弱的粗略評(píng)估,。

【保存條件】

    2℃-8℃保存，有效期6個(gè)月,。

【注意事項(xiàng)】

生物安全

1,、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴(yán)格防止交叉污染,，所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。

2,、試劑盒的液體組分中,，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應(yīng),，避免吸入煙霧與皮膚接觸,。

3、底物液對(duì)皮膚,、眼睛和上呼吸道有刺激作用,，避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套,，實(shí)驗(yàn)完成后*洗手,。

技術(shù)提示

1、混合蛋白溶液時(shí),，避免起泡,。

2,、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí)，每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭,，公共組分應(yīng)該懸臂加樣,，避免交叉污染。

3,、合適的溫育時(shí)間,，和充分的洗滌步驟,，是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件,。

4、底物溶液為無色液體,，保存過程中變?yōu)樗{(lán)色,，代表底物溶液已經(jīng)失效，不得使用,。

5,、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致，加入終止液后,，藍(lán)色底物產(chǎn)物,，會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。

6,、實(shí)驗(yàn)中,，用剩的板條，應(yīng)立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。

7、所有液體組分,，使用前充分搖勻,，嚴(yán)格按照說明書標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作,。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑,，所有污染性的一次性材料，應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類型和危險(xiǎn)性級(jí)別,，進(jìn)行廢物和污物的處理，同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對(duì)待所有的廢物和污物,。