僅供科研使用,，不得用于臨床檢驗,。

小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒（ELISA）

說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱：小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)定性檢測試劑盒（ELISA）

英文名稱：Mouse anti-hepatitis B virus surface antibody（HBsAb） ELISA KIT

【包裝規(guī)格】

96人份/盒

【預期用途】

僅供科研使用,，定性檢測血清,、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb),。

【檢驗原理】

試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預先包被人乙肝表面抗原（HBsAg）的包被微孔中，依次加入標本,、陰性和陽性對照,、HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠抗人乙肝表面抗體(HBsAb)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，判定陰陽性。

【主要組成成分】

主要成分

需要但未提供的材料及耗材

  1,、酶標儀

2,、精密移液器及一次性吸頭

3、蒸餾水

4,、洗瓶或者自動洗板機

5,、37℃水浴鍋或恒溫箱

6、500ml量筒

7,、無粉一次性乳膠手套

【儲存條件及有效期】

  1,、2-8℃保存，切勿冷凍,，有效期6個月,。

  2、開封使用后,，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,，密閉自封袋，并將全部試劑放回2-8℃冰箱,。

  3,、開封后，按照建議的條件保存,，校準品,、包被微孔板和HRP標記抗體，有效期為14天,，其他成分在標簽標明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的,。

【適用儀器】

  半自動的酶標儀，如Thermo MK3,，或者國產(chǎn)酶標儀,。

【樣本要求】

  樣本類型和采集

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,，不得使用疊氮鈉做為防腐劑,。

1、細胞培養(yǎng)上清：4000rpm條件下離心20min，去除細胞顆粒和聚合物,，上清液保存在- 20℃以下,，避免反復凍融。

2,、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,，操作過程中避免任何細胞刺激，4000rpm條件下離心20min,，小心地分離出血清，保存在- 20℃以下,，避免反復凍融,。

3、血漿：肝素,，EDTA,，或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,，離心20分鐘取上清,，血漿保存在-20℃以下，避免反復凍融,。

樣本保存和穩(wěn)定性

樣本在2-8℃條件下,，可以儲存72h，或者在- 20℃儲存6個月,。樣本收集后,，不是一次檢測完，請按一次用量分裝凍存,，避免反復凍融,，使用時在室溫下解凍，確保樣品均勻充分解凍,。

【檢驗方法】

試劑準備

1,、使用前，所有的組分都要至少復溫30min,，確保充分復溫到室溫,。

2、濃縮洗滌液：從冰箱取出的濃縮洗滌液,，會有結(jié)晶產(chǎn)生,，這屬于正常現(xiàn)象,，水浴加熱使結(jié)晶*溶解,。濃縮洗滌液與蒸餾水，按1:20稀釋,，即1份的濃縮洗滌液,，添加19份的蒸餾水,。

操作程序

1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃,。
2.   設(shè)置陰性對照孔,、陽性對照孔和樣本孔，陰性,、陽新對照孔各加50μL對照品,；
3.   樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。
4.   除空白孔外,，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔,，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5.   棄去液體，吸水紙上拍干,，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min，甩去洗滌液,，吸水紙上拍干,，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.   每孔加入底物A,、B各50μL,，37℃避光孵育15min。
7.   每孔加入終止液50μL,，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值。

【檢驗結(jié)果的解釋】

1. 陰性對照OD值：小于0.2,。

2. 陽性對照OD值：大于0.8,。

3. 陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對照OD值+0.25，樣本OD值大于閾值,，判定為陽性,，反之，為陰性,。

【試驗方法的局限性】

該試驗僅作為定性檢測小鼠血清,、血漿中小鼠抗人乙肝表面抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強,、中,、弱的粗略評估。

【保存條件】

    2℃-8℃保存，有效期6個月,。

【注意事項】

生物安全

1,、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定，嚴格防止交叉污染,，所有樣品,、洗棄液和各種廢棄物都應按照傳染物進行處置。

2,、試劑盒的液體組分中,，含有proclin-300防腐劑，可能引起皮膚過敏反應,，避免吸入煙霧與皮膚接觸,。

3、底物液對皮膚,、眼睛和上呼吸道有刺激作用，避免吸入煙霧,。戴上防護手套,，實驗完成后*洗手。

技術(shù)提示

1,、混合蛋白溶液時,，避免起泡。

2,、加校準品與樣本時,，每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭，公共組分應該懸臂加樣,，避免交叉污染,。

3、合適的溫育時間,，和充分的洗滌步驟,，是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

4,、底物溶液為無色液體,，保存過程中變?yōu)樗{色，代表底物溶液已經(jīng)失效,，不得使用,。

5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,，加入終止液后,，藍色底物產(chǎn)物，會瞬間變?yōu)辄S色。

6,、實驗中,，用剩的板條，應立即放回自封袋中,，密封（低溫干燥）保存,。

7、所有液體組分,，使用前充分搖勻,，嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作,。

廢物處理

  所有使用或未使用的試劑,，所有污染性的一次性材料，應當遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,，每個實驗室都有責任根據(jù)其實驗的類型和危險性級別,，進行廢物和污物的處理，同時要嚴格依照有關(guān)規(guī)定對待所有的廢物和污物,。