蛋白純化系統(tǒng)分為粗分離和精細純化兩個階段
閱讀：2314 發(fā)布時間：2018-10-20
蛋白純化系統(tǒng)的目的是將目標(biāo)蛋白質(zhì)從細胞裂解液的全部組分中分離出來，同時仍保留蛋白的生物學(xué)活性及化學(xué)完整性,。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務(wù),，需根據(jù)蛋白的特性選擇合適的純化方法來提高獲得的蛋白制品的純度。
蛋白純化系統(tǒng)的原理為：不同蛋白質(zhì)的氨基酸序列及空間結(jié)構(gòu)不同,，導(dǎo)致其在物理,、化學(xué)、生物學(xué)等性質(zhì)上存在差異,，利用待分離蛋白質(zhì)與其它蛋白質(zhì)性質(zhì)上的差異,，即可以設(shè)計出一套合理的蛋白純化系統(tǒng)方案。
蛋白純化系統(tǒng)大致分為粗分離階段和精細純化階段兩個階段,。粗分離階段主要將目的蛋白和其他細胞成分如RNA,、DNA等分開，常用的方法為硫酸銨沉淀法,。精細純化階段的目的是把目的蛋白與其他大小及理化性質(zhì)接近的蛋白區(qū)分開來,，常用的方法有：凝膠過濾層析,、離子交換層析,、疏水層析、親和層析等,。
凝膠過濾（也叫排阻層析或分子篩）是一種根據(jù)分子大小從混合物中分離蛋白質(zhì)的方法,。不同蛋白的形狀及分子大小存在差異，在混合物通過含有填充顆粒的凝膠過濾層析柱時,，由于各種蛋白的分子大小不同,，擴散進入特定大小孔徑顆粒內(nèi)的能力也各異，大的蛋白分子會被先洗脫出來,，分子越小,，越晚洗脫，從而達到分離蛋白的目的,。一般來說,，凝膠過濾層析柱越細、越長純化的效果越好,。凝膠過濾層析詳細介紹
凝膠過濾層析所能純化的蛋白分子量范圍很寬,，純化過程中也不需要能引起蛋白變性的有機溶劑,。缺點是所用樹脂有輕度的親水性，電荷密度較高的蛋白容易吸附在上面,，不適宜純化電荷密度較高的蛋白,。
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