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廣州立珠生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： phenomenex色譜柱,228-35145密封圈,FE28-Standard |
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2019-3-6 閱讀(4203)
液相色譜中，分離效果好壞的一個(gè)重要因素是色譜填料的選擇.
一、硅膠基質(zhì)填料
1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其它具有極性官能團(tuán)，如胺基和氰基的鍵合相填料,。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團(tuán)極性較強(qiáng)，因此,，分離的次序是依據(jù)樣品中各組分的極性大小,，即極性較弱的組份先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低,，如正己烷,，二氯甲烷等。
2,、反向色譜 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質(zhì),，表面鍵合有極性相對較弱官能團(tuán)的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強(qiáng),，通常為水,、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物,。樣品流出色譜柱的順序是極性較強(qiáng)的組分先被沖洗出,，而極性較弱的組分在色譜柱上有更強(qiáng)的保留,。常用的反向填料有C18、C8,、C4等,。
二、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等,，其重要優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1-14均可使用,。相對于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有更強(qiáng)的疏水性,；大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效?，F(xiàn)有的聚合特填料的缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低,。
三,、其它無機(jī)填料
其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化，由于其特殊的性質(zhì),，一般于特殊的用途,。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相,，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性,。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng),。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于在HPLC流動相中不會被溶解,，這類柱可在任何PH與溫度下使用,。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強(qiáng),，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床,，其優(yōu)點(diǎn)是可以在PH高達(dá)12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng),，應(yīng)用范圍受到一定限制,，所以未能廣泛應(yīng)用。新型色譜氧化鋯基質(zhì)填料也可用于HPLC,。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱,，應(yīng)用PH1-14，溫度可達(dá)100℃,。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究,，加之面臨的實(shí)驗(yàn)難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進(jìn)行之中,。
目前,，商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售,，而目前分析分離主要用3和5um填料。填料的粒度主要影響填充柱的兩個(gè)參數(shù),，即柱效和背壓,。粒度越小，柱壓越大,，柱壓的增加限制了粒度小于3um的填料應(yīng)用,。在相同選擇性條件下，提高柱效可提高分離度,，但不是*的因素,。如果固定相選擇是正確，但是分離度不夠,，那么選擇用更小的粒度的填料是很有用的,。3um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%；然而,，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍,。與此同時(shí)，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱,，即相同的塔板數(shù)或分離能力,，但是柱長更短，以縮短分析時(shí)間,。另外,，可以彩用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇,，以降低色譜柱的壓力,。廣州立珠生物科技有限公司作為專業(yè)的代理商為您提供專業(yè)便捷的售前售后服務(wù)。
