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細(xì)胞計(jì)數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的重要步驟,,為了解細(xì)胞的濃度,、數(shù)量和活率等信息,實(shí)驗(yàn)人員常用臺(tái)盼藍(lán)染料或AOPI熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色-計(jì)數(shù),。
1、臺(tái)盼藍(lán)染色法
臺(tái)盼藍(lán)染色是細(xì)胞計(jì)數(shù)中常用的活/死細(xì)胞鑒定染色方法之一,。
原理:正常的活細(xì)胞,,胞膜結(jié)構(gòu)完整,能夠排斥臺(tái)盼藍(lán),,細(xì)胞不被染色,;而死細(xì)胞的胞膜不完整,通透性增加,,既死細(xì)胞會(huì)被染成藍(lán)色,,利用臺(tái)盼藍(lán)染料的特性便可區(qū)分活/死細(xì)胞。
缺點(diǎn):
1-臺(tái)盼藍(lán)對(duì)細(xì)胞有毒害作用,,會(huì)致死有損傷的細(xì)胞,,導(dǎo)致細(xì)胞活性檢測(cè)結(jié)果有所偏差;
2-細(xì)胞碎片多,、雜質(zhì)多等情況下,,無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)。
適用細(xì)胞種類:培養(yǎng)系細(xì)胞,。
2,、AOPI染色法
當(dāng)細(xì)胞樣品中的雜質(zhì)過(guò)多,明場(chǎng)下無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確計(jì)數(shù)時(shí),,我們可以在熒光通道下,,用AOPI熒光染料對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色。
原理:AOPI熒光染料因其只與DNA和RNA結(jié)合的特性——既活細(xì)胞呈現(xiàn)綠色,,死細(xì)胞呈現(xiàn)紅色,,利用AOPI染色法,可排除雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的干擾,,快速區(qū)分活/死細(xì)胞,。
優(yōu)點(diǎn):可排除紅細(xì)胞,、血小板、細(xì)胞碎片等雜質(zhì)對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的干擾,。
缺點(diǎn):與臺(tái)盼藍(lán)試劑相比,,成本較高。
適用細(xì)胞種類:免疫細(xì)胞,、原代細(xì)胞,、血液細(xì)胞等。
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