細胞計數是細胞培養(yǎng)過程中的重要步驟,,為了解細胞的濃度,、數量和活率等信息,實驗人員常用臺盼藍染料或AOPI熒光染料對細胞進行染色-計數,。
1,、臺盼藍染色法
臺盼藍染色是細胞計數中常用的活/死細胞鑒定染色方法之一。
原理:正常的活細胞,,胞膜結構完整,,能夠排斥臺盼藍,細胞不被染色,;而死細胞的胞膜不完整,,通透性增加,既死細胞會被染成藍色,,利用臺盼藍染料的特性便可區(qū)分活/死細胞,。
缺點:
1-臺盼藍對細胞有毒害作用,會致死有損傷的細胞,,導致細胞活性檢測結果有所偏差,;
2-細胞碎片多、雜質多等情況下,,無法進行準確計數,。
適用細胞種類:培養(yǎng)系細胞。
2,、AOPI染色法
當細胞樣品中的雜質過多,,明場下無法進行準確計數時,我們可以在熒光通道下,,用AOPI熒光染料對細胞進行染色,。
原理:AOPI熒光染料因其只與DNA和RNA結合的特性——既活細胞呈現綠色,死細胞呈現紅色,,利用AOPI染色法,,可排除雜質對目標細胞的干擾,快速區(qū)分活/死細胞,。
優(yōu)點:可排除紅細胞,、血小板、細胞碎片等雜質對目標細胞的干擾,。
缺點:與臺盼藍試劑相比,,成本較高,。
適用細胞種類:免疫細胞、原代細胞,、血液細胞等,。
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