細(xì)胞計數(shù)是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的重要步驟,，“傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)方法"是在顯微鏡下使用血細(xì)胞計數(shù)板人工計數(shù)。這里博大博聚為大家介紹下傳統(tǒng)細(xì)胞計數(shù)的詳細(xì)的步驟,，供大家參考,。

1、準(zhǔn)備好血細(xì)胞計數(shù)板

1)     先用無水乙醇清潔血細(xì)胞計數(shù)板表面和蓋玻片,；

2)     再用純水清潔血細(xì)胞計數(shù)板表面和蓋玻片,；

3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

4)     在血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)池上方蓋上專用的蓋玻片,。

注意：最好不要擦拭血細(xì)胞計數(shù)板的計數(shù)池,，防止標(biāo)識線損壞。

2,、制備細(xì)胞懸液

1)     貼壁生長的細(xì)胞,，使用胰酶消化的方法使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶表面脫落；

2)     漩渦混勻或使用移液器反復(fù)吹吸細(xì)胞懸液,，盡量減少細(xì)胞團(tuán)簇,；

3)     懸浮細(xì)胞則可以直接進(jìn)行取樣計數(shù)；

4)     細(xì)胞懸液濃度控制在1×10⁶個細(xì)胞/mL左右,。

注意：

a)      盡量少,、盡量小的細(xì)胞團(tuán)簇；

b)     如需計算活率，則需將細(xì)胞懸液按照1：1的比例加入等量的0.4%的臺盼藍(lán)染料,，混勻后,，靜置1~2分鐘。    

3,、細(xì)胞加樣

1)     移液器輕吹細(xì)胞懸液使其混合均勻,；

2)     將細(xì)胞懸液與臺盼藍(lán)染料按1:1體積混合均勻；

3)     取出10uL細(xì)胞懸液,，將細(xì)胞懸液滴加于血細(xì)胞計數(shù)板邊緣凹槽處,，此時液滴將在虹吸的作用下進(jìn)入蓋玻片下方的計數(shù)池。

注意：                                              

1)     每次加樣前要混勻細(xì)胞懸液,，防止細(xì)胞沉降造成取樣誤差增大,；

2)     加樣過程中，要一次性將細(xì)胞懸液注入計數(shù)室,，防止氣泡產(chǎn)生,，否則要重做；

3)     加樣時不要將細(xì)胞懸液直接吹入計數(shù)池,，會造成細(xì)胞分布不均勻,。

4、 人工細(xì)胞計數(shù)

計數(shù)工具：10X物鏡的顯微鏡,、血細(xì)胞計數(shù)板,。

1)     加樣后，將血細(xì)胞計數(shù)板靜置數(shù)分鐘,；

2)     把血細(xì)胞計數(shù)板放置在顯微鏡的載物臺進(jìn)行觀察-計數(shù)-記錄,；

3)     分別計數(shù)大方格1-2-3-4中的細(xì)胞總數(shù)。

注意：

1)     計數(shù)時建議重復(fù)1-2次,，取平均值,，減小計數(shù)誤差；

2)     四個區(qū)域的細(xì)胞數(shù)量偏差不應(yīng)超過 5%,，否則要重新加樣。

3)     對橫跨刻度上的細(xì)胞,，依照“數(shù)上不數(shù)下,，數(shù)左不數(shù)右"的原則進(jìn)行計數(shù)。

4)    為降低細(xì)胞計數(shù)誤差,，濃度最好控制在1×10⁶個細(xì)胞/mL左右,；

5)     計數(shù)時，只計數(shù)完整的細(xì)胞,，如有聚團(tuán)細(xì)胞則按一個細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),。

5、 血細(xì)胞計數(shù)板濃度計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)

（中國的標(biāo)準(zhǔn)：JJG 552-1988血細(xì)胞計數(shù)板試行檢定規(guī)程）

1)     如上圖所示，當(dāng)血細(xì)胞計數(shù)板放上蓋玻片后,，平臺與蓋玻片之間的距離 (即高度)為 0.1mm,；

2)     平臺中心部分各以3mm長，3mm寬精確劃分為9個大方格,，稱為計數(shù)室,，每個大方格面積為1mm²，體積為 0.1mm³,；

3)     細(xì)胞濃度 (mL)=(四個大方格細(xì)胞數(shù)之和)/4X2（染液稀釋倍數(shù)）X 10⁴⁼,？個細(xì)胞/mL。

注意：如果不加入臺盼藍(lán)染料,，則無需乘以2,。

相信有些小伙伴，即使花費(fèi)很長時間熟悉,，并實際接觸細(xì)胞計數(shù)操作的全部流程后,，還是會有結(jié)果不滿意、人工操作效率低,、結(jié)果無法一目了然,、細(xì)胞計數(shù)數(shù)到“眼疼"的情況。

在這里,，我向大家推薦一款博大博聚自主研發(fā)的,、可以使用標(biāo)準(zhǔn)的血細(xì)胞計數(shù)板的全自動細(xì)胞計數(shù)儀！

6,、全自動細(xì)胞計數(shù)儀——JSY-SC-031N型

全自動細(xì)胞計數(shù)儀（JSY-SC-031N型）是一款一體式明場細(xì)胞計數(shù)儀,，內(nèi)置10X光學(xué)放大系統(tǒng)、全自動調(diào)焦裝置,、精密的X,、Y、Z三軸聯(lián)動平臺,、強(qiáng)大的細(xì)胞識別算法,。

儀器使用標(biāo)準(zhǔn)的血細(xì)胞計數(shù)板，可實時預(yù)覽細(xì)胞圖像,，將傳統(tǒng)的細(xì)胞計數(shù)方式可視化,、自動化、智能化,，為您呈現(xiàn)真實可信的實驗結(jié)果,。

7、血細(xì)胞計數(shù)板上機(jī)實拍圖案例

8,、細(xì)胞計數(shù)結(jié)果包括

總細(xì)胞濃度,、活/死細(xì)胞濃度,、活/死細(xì)胞比率、總細(xì)胞聚團(tuán)率/濃度,、活細(xì)胞聚團(tuán)率/濃度,、死細(xì)胞聚團(tuán)率/濃度等計數(shù)結(jié)果、原始圖片,、識別圖片,、柱狀圖、散點圖,、等高線圖,、報告單等…

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