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液相色譜法測定食品中的激素含量
食品中激素含量的測定——液相色譜法:樣品中的激素經(jīng)提取分離后,,以液相色譜儀分離測定,。利用保留時間定性,峰高或峰面積與標準比較定量,。
測定方法步驟:
1 提取
取可食用部分,,搗成勻漿,稱取50g左右,,置于250mL具塞錐形瓶中,。加入內(nèi)標物an眠酮20.00μg/mL貯備液1.0mL,再加甲醇-丙 酮(1:1)混合液150mL,,在振蕩器上振蕩提取30min,,過濾,殘渣用少量甲醇-丙酮(1:1)混合液洗滌數(shù)次,,洗滌并入濾液中,,于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器或K-D濃縮器中將溶劑蒸除。殘渣用20mL甲醇溶解,,經(jīng)盛有無水硫酸鈉的漏斗濾入250mL分液漏斗中,,再用10mL甲醇分數(shù)次洗滌漏斗及內(nèi)容物,洗液并入濾液中,。加pH=5.2的醋酸鈉緩沖溶液80mL左右,,混勻后分三次用二氯甲烷(50mL、30mL,、30mL)振搖提取,,合并提取液,并用無水硫酸鈉脫水,,在水浴上揮干溶劑,。殘渣用甲醇溶解并定容至10.0mL,混勻后,,以3000r/min速度離心5min,,取上層清液供色譜分析用。
2 色譜條件:
色譜柱4.6mm×200mm,;流動相:乙腈-甲醇-四氫呋喃-0.01mol/L醋酸鈉溶液(20:20:10:50),;流速1.0ml/min;測定波長270nm,;進樣體積10μL,。
3 測定
取供色譜用的樣品溶液10μL,注入液相色譜儀,,以內(nèi)標法定量,。