1M山梨醇溶液/酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞制備液
英文名:1M Sorbitol Solution
描述：
1M的山梨醇一般用于釀酒酵母或者裂殖酵母電轉(zhuǎn)感受態(tài)的制備,。
酵母感受態(tài)細(xì)胞的制備：
1.活化菌種,。-80℃保存的菌種在固體YPDA培養(yǎng)基（YPDA加20g Agar/L）上劃線，在30℃培養(yǎng)2-4天,。
2.挑取酵母單菌落在固體YPDA培養(yǎng)基上劃3-5 mm的短線,，在30 ℃培養(yǎng)2-4天。待酵母單菌落長至2 mm長時，接種,。
3.把酵母細(xì)胞接種到50 ml液體YPDA培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng),，待OD600到1.3-1.5范圍內(nèi)。
4.將酵母菌置于冰上放置10 min后,，收集細(xì)胞,。1000 g，離心5 min, 去上清,。
5.沉淀用30-50 ml的預(yù)冷的無菌水懸浮,。1000 g，離心5 min,，去上清,。重復(fù)洗滌2次。
6.沉淀用5mL 冰上預(yù)冷的1M 山梨醇溶液重懸,。1000 g,，離心5 min，去上清,。
7.沉淀用0.4 mL 的預(yù)冷的1M 山梨醇溶液重懸，按照40 uL 分裝,。
酵母轉(zhuǎn)化：
1.在40uL 的酵母感受態(tài)細(xì)胞中,，加入5uL（100ng）的質(zhì)粒，混勻,。
2.轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的電轉(zhuǎn)槽中,，電擊。
3.在電轉(zhuǎn)槽中加入500uL 預(yù)冷的1M 山梨醇溶液,，輕柔混勻,。
4.涂布于相應(yīng)的篩選培養(yǎng)基上，28-30℃培養(yǎng)3-5天,。
供應(yīng)產(chǎn)品列表：
| DO Supplement -Ade |
| DO Supplement -Ade/-His |
| DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Lys |
| DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Met |
| DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp/-Ura/-Met |
| DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Ura |
| DO Supplement -Ade/-His/-Met |
| DO Supplement -Ade/-His/-Trp |
| DO Supplement -Ade/-His/-Ura/-Trp |
| DO Supplement -Ade/-Leu |
| DO Supplement -Ade/-Leu/-His |
| DO Supplement -Ade/-Leu/-Trp |
| DO Supplement -Ade/-Leu/-Ura |
| DO Supplement -Ade/-Trp |
| DO Supplement -Ade/-Ura |
| DO Supplement -Arg |
| DO Supplement -Arg/-His/-Leu/-Lys/-Ura |
| DO Supplement -Arg/-Leu/-Ura |
| DO Supplement -Cys/-Met |
| DO Supplement -Cys/-Met/-Ura |
| DO Supplement -Cys-His/-Leu/-Met/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -Glu/-Ura |
| DO Supplement -His |
| DO Supplement -His/-Leu/-Lys |
| DO Supplement -His/-Leu/-Lys/-Met/-Ura |
| DO Supplement -His/-Leu/-Lys/-Ura |
| DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp/-Ura |
| DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Ura |
雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認(rèn)識,。細(xì)胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄因子的參與。80年代的工作表明,， 轉(zhuǎn)錄因子在結(jié)構(gòu)上是組件式的（modular）,， 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互的結(jié)構(gòu)域構(gòu)成，其中有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域（DNA binding domain,，簡稱為BD）和轉(zhuǎn)錄結(jié)構(gòu)域（activation domain,，簡稱為AD），它們是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所的,。單獨的BD雖然能和啟動子結(jié)合,，但是不能轉(zhuǎn)錄。而不同轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細(xì)胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性結(jié)構(gòu)域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結(jié)合到Gal4結(jié)合位點并轉(zhuǎn)錄,。
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