1M 醋/乙酸鋰溶液 酵母
英文名:1M Lithium Acetate solution
描述:齊岳出品的酵母轉(zhuǎn)化試劑盒主要用于釀酒酵母質(zhì)粒轉(zhuǎn)化實驗,,該試劑盒遵循廣大用戶的使用習慣,分別提供PEG,、LiAc和Carrier DNA溶液,,PEG,、LiAc均經(jīng)過濾,Carrier DNA經(jīng)優(yōu)化處理,,更有助于質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化效率,。該試劑盒可根據(jù)實際需要靈活配制1 × LiAc溶液和轉(zhuǎn)化預混液,既方便使用,,又經(jīng)濟實惠,。
感受態(tài)細胞制備:
1.活化菌種。-80 ℃保存的菌種在YPDA培養(yǎng)基平板上劃線,,30 ℃培養(yǎng)2-4天,。
2.挑取酵母單菌落在YPDA培養(yǎng)基平板上劃3-5 mm的短線,30 ℃培養(yǎng)2-4天,。
3.待酵母單菌落長至直徑2 mm時,,把酵母細胞接種到3 mL YPDA液體培養(yǎng)基中,30 ℃過夜培養(yǎng),。
4.天轉(zhuǎn)接到含有30-50 mL YPDA液體培養(yǎng)基的三角瓶中繼續(xù)培養(yǎng),,待OD6000.4-0.5,3000 rpm離心5 min,,棄上清,。
5.沉淀用30-50 mL的無菌的去離子水懸浮。3000 rpm離心5 min,,棄上清。
6.沉淀用1.5 mL 1 × LiAc(150 μL 10 × LiAc Solution加1350 μL無菌水)重懸后轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中,,3000 rpm離心5 min,,棄上清。
注意:10 × LiAc Solution經(jīng)過pH緩沖,,添加TE作為緩沖劑,。
7.加入1 mL 1 × LiAc重懸,小體積轉(zhuǎn)化按照每管100 μL分裝,,用于文庫轉(zhuǎn)化不分裝,。
8.3000 rpm離心5 min,棄上清,,感受態(tài)細胞即制備完畢,。
注意:制備好的感受態(tài)立即使用,在8步離心前,,室溫放置不應過5小時,。
供應產(chǎn)品列表:
DO Supplement -His/-Met/-Ura |
DO Supplement -His/-Trp |
DO Supplement -Leu |
DO Supplement -Leu/-Ile/-Val |
DO Supplement -Leu/-Lys/-Trp |
DO Supplement -Leu/-Met |
DO Supplement -Leu/-Met/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Leu/-Met/-Ura |
DO Supplement -Leu/-Ura |
DO Supplement -Met |
DO Supplement -Met/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Met/-Ura |
DO Supplement -Ura |
DO Supplement-Ade-His-Leu-Trp |
DO Supplement -His/-Leu |
DO Supplement-His/-Leu/-Met/-Trp |
DO Supplement -His/-Leu/-Trp |
DO Supplement-His/-Leu/-Trp/-Ura |
DO Supplement-His/-Leu/-Ura |
DO Supplement-His/-Trp/-Ura |
DO Supplement -His/-Ura |
DO Supplement-Leu/-Met/-Trp |
DO Supplement -Leu/-Trp |
DO Supplement-Leu/-Trp/-Ura |
DO Supplement -Met/-Trp |
DO Supplement -Trp |
DO Supplement -Trp/-Ura |
Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder |
Total Yeast Culture Amino acid Premixed Powder |
酵母單雜交早是1993年由Li等從酵母雙雜交發(fā)展而來,通過對報告基因的表型檢測,,分析DNA與蛋白之間的相互作用,,以研究真核細胞內(nèi)的基因表達調(diào)控,。由于酵母單雜交方法檢測某些轉(zhuǎn)錄因子與順式作用元件專一性相互作用的敏感性和性,現(xiàn)已被用于克隆細胞中含量微弱的,、用生化手段難以純化的某些轉(zhuǎn)錄因子,。
酵母單雜交(Yeast one-hybrid)是根據(jù)DNA結合蛋白(即轉(zhuǎn)錄因子)與DNA順式作用元件結合調(diào)控報告基因表達的原理,克隆與靶元件結合的轉(zhuǎn)錄因子基因(cDNA)的方法,。其理論基礎是:許多真核生物的轉(zhuǎn)錄子由物理和功能上的DNA結合區(qū)(DNA-binding domain BD)和轉(zhuǎn)錄區(qū)(Activation domain AD)組成,,因此可構建基因與AD的融合表達載體,在酵母中表達為融合蛋白時,,根據(jù)報道基因的表達情況,,便能篩選出與靶元件有結合區(qū)域的蛋白。理論上,,在單雜交檢測中,,靶元件都可被用于篩選一種與之有結合區(qū)域的蛋白。
雙雜交系統(tǒng)的建立得力于對真核生物調(diào)控轉(zhuǎn)錄起始過程的認識,。細胞起始基因轉(zhuǎn)錄需要有反式轉(zhuǎn)錄因子的參與,。80年代的工作表明, 轉(zhuǎn)錄因子在結構上是組件式的(modular),, 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互的結構域構成,,其中有DNA結合結構域(DNA binding domain,簡稱為BD)和轉(zhuǎn)錄結構域(activation domain,,簡稱為AD),,它們是轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮功能所的。單獨的BD雖然能和啟動子結合,,但是不能轉(zhuǎn)錄,。而不同轉(zhuǎn)錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉(zhuǎn)錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并轉(zhuǎn)錄,。
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