目前對于藥品中含有的極少量物質(zhì)（如基因毒性雜質(zhì)等）,，在對其進行痕量分析時,，通常采用的檢測手段是：利用先進的液質(zhì)聯(lián)用（如LC-MS或LC-MS/MS等）、氣質(zhì)聯(lián)用（如GC-MS或GC-MS/MS等）設(shè)備,，對其微量物質(zhì)進行檢測時所需液相色譜系統(tǒng)可能為更高級的超高效液相色譜儀,。
如檢測藥物中含有亞硝胺類基因毒性雜質(zhì)NDMA，根據(jù)不同原料藥的性質(zhì)不同,，目前國際上公布的方法主要有：GC-MS法,、GC-MS/MS法、UPLC-APCI-MS/MS法,，HPLC-UV法（EDQM公布）,。國內(nèi)官fang公布的方法主要有GC-MS法、GC-MS/MS法,、UPLC-APCI-MS/MS法,，如中國藥典2015年版二部推薦使用GC-MS法（詳見《纈沙坦》原料中N-ya硝基二甲胺的含量測定方法），不推薦使用HPLC-UV法,，因為HPLC-UV法靈敏度比質(zhì)譜儀的靈敏度差很多,，而且專屬性差些，容易受到檢測干擾,，故HPLC-UV法具有很大的局限性,，只能準(zhǔn)確測定那些含量相對較高的物質(zhì)。
然而現(xiàn)有檢測技術(shù)中：
● 質(zhì)譜儀價格昂貴,，運行成本高,，所需的試劑要求高，抗干擾能力差,，維護保養(yǎng)費用很高,，同時對質(zhì)譜儀操作人員的水平要求非常高，需要高層次的人才方能準(zhǔn)確操控,。故質(zhì)譜儀普及率非常低,，一般企業(yè)較少購置，對于需要使用質(zhì)譜儀進行痕量分析時只能委托特定的機構(gòu)使用質(zhì)譜儀進行檢測,。
● 氣相色譜/質(zhì)譜法操作過程繁瑣,，經(jīng)過前處理后樣品損失嚴(yán)重。
● 高效液相色譜儀價格便宜,，操作容易,，覆蓋面廣,，一般企業(yè)均很常見。但是單純使用HPLC-UV法進行檢測含量極少的物質(zhì)時,，其靈敏度差,，不能準(zhǔn)確定量檢測出復(fù)雜原料藥中含量極低的物質(zhì)，且檢測過程中目標(biāo)化合物所受干擾亦較大,，目標(biāo)化合物與其它雜峰之間的分離難度較大,。
在缺少質(zhì)譜儀的情況下，
中國藥企如何走出雜質(zhì)痕量檢測的困境呢,？
/Father's day/
基于以上痕量檢測的難點,，沒有質(zhì)譜儀的幫助，實驗人員是否可以通過長期大量的研究,，不斷嘗試各項色譜條件的調(diào)試,，諸如：流動相試劑的組成、梯度程序設(shè)置,、柱溫,、流速的改變等。
特別是色譜柱的篩選,，如雖然同樣都是十八烷基硅烷鍵合色譜柱,，可以嘗試不同品牌、不同系列的C18柱,，色譜柱間填料的差異會呈現(xiàn)出對樣品的不同選擇性,。另外，色譜柱規(guī)格的差異也會帶來不同的檢測效果,，如色譜柱的內(nèi)徑越細靈敏度越高,、色譜柱越長柱效越高、填料的粒徑越小分離效率越高……光是色譜柱就有多達7項以上的可調(diào)節(jié)參數(shù),。
最近就有一家藥企嘗試走了這樣一條路,，對尼扎替丁中所含痕量雜質(zhì)N-ya硝基二甲胺（NDMA）檢測方法進行了長期研究，最終探索出一種采用HPLC法測定樣品中NDMA的方法,，該方法簡便快速,，且測定結(jié)果準(zhǔn)確。
這就是湖南威特制藥股份有限公司,。在他們的開發(fā)報告中記錄到：
“我們首先嘗試解決了色譜分離的問題,，因供試品溶液濃度很大，其他峰對目標(biāo)物質(zhì)NDMA的干擾較多,，在摸索優(yōu)化檢測方法的過程中,，對色譜柱的選擇做了大量的工作，既要不被干擾,，又要保證峰形正常,，且需能夠增加該峰的檢出能力,，最后選擇了特定的月旭Ultimate® ODS-3 4.0×250mm，3μm色譜柱,，且此型號的色譜柱批間差異較小,。保證了該方法成功通過了方法學(xué)驗證，并最終獲得了發(fā)明專li授權(quán),。”
湖南威特測試了來自至少4個色譜柱廠家的十幾種C18柱，最終月旭Ultimate® ODS-3 4.0×250mm,，3μm這款柱子展現(xiàn)了其du特的分離和檢測特性,，4.0mm內(nèi)徑具有更高的靈敏度，3μm粒徑也提供了更高的柱效,。在這款色譜柱的基礎(chǔ)上,，客戶繼續(xù)配合優(yōu)化其他的色譜條件，最終確定了這個簡便快捷,，且測定結(jié)果準(zhǔn)確的HPLC方法,。
艱辛的付出，終于獲得了回報,。感謝湖南威特為我們示范了超高的液相方法開發(fā)水平,，展示了不同色譜條件配合玩轉(zhuǎn)色譜柱，為方法開發(fā)帶來的無限可能,！
參考文獻：
一種HPLC法檢測尼扎替丁中N-ya硝基二甲胺的方法
（專li號：ZL202110045224.4,；授權(quán)公告日：2023.07.28）
附：Ultimate® ODS-3色譜柱技術(shù)參數(shù)
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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