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藥品中基因毒性雜質(zhì)的痕量分析,，非得用MS嗎,？
目前對(duì)于藥品中含有的極少量物質(zhì)（如基因毒性雜質(zhì)等），在對(duì)其進(jìn)行痕量分析時(shí),，通常采用的檢測(cè)手段是：利用先進(jìn)的液質(zhì)聯(lián)用（如LC-MS或LC-MS/MS等）,、氣質(zhì)聯(lián)用（如GC-MS或GC-MS/MS等）設(shè)備,，對(duì)其微量物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)所需液相色譜系統(tǒng)可能為更高級(jí)的超高效液相色譜儀。
如檢測(cè)藥物中含有亞硝胺類基因毒性雜質(zhì)NDMA,，根據(jù)不同原料藥的性質(zhì)不同,，目前國(guó)際上公布的方法主要有：GC-MS法、GC-MS/MS法,、UPLC-APCI-MS/MS法,，HPLC-UV法（EDQM公布）。國(guó)內(nèi)官fang公布的方法主要有GC-MS法,、GC-MS/MS法,、UPLC-APCI-MS/MS法，如中國(guó)藥典2015年版二部推薦使用GC-MS法（詳見(jiàn)《纈沙坦》原料中N-ya硝基二甲胺的含量測(cè)定方法）,，不推薦使用HPLC-UV法,，因?yàn)镠PLC-UV法靈敏度比質(zhì)譜儀的靈敏度差很多，而且專屬性差些,，容易受到檢測(cè)干擾,，故HPLC-UV法具有很大的局限性，只能準(zhǔn)確測(cè)定那些含量相對(duì)較高的物質(zhì),。
然而現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)中：
● 質(zhì)譜儀價(jià)格昂貴,，運(yùn)行成本高，所需的試劑要求高,，抗干擾能力差,，維護(hù)保養(yǎng)費(fèi)用很高，同時(shí)對(duì)質(zhì)譜儀操作人員的水平要求非常高,，需要高層次的人才方能準(zhǔn)確操控,。故質(zhì)譜儀普及率非常低，一般企業(yè)較少購(gòu)置,，對(duì)于需要使用質(zhì)譜儀進(jìn)行痕量分析時(shí)只能委托特定的機(jī)構(gòu)使用質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè),。
● 氣相色譜/質(zhì)譜法操作過(guò)程繁瑣，經(jīng)過(guò)前處理后樣品損失嚴(yán)重,。
● 高效液相色譜儀價(jià)格便宜,，操作容易，覆蓋面廣,，一般企業(yè)均很常見(jiàn),。但是單純使用HPLC-UV法進(jìn)行檢測(cè)含量極少的物質(zhì)時(shí)，其靈敏度差,，不能準(zhǔn)確定量檢測(cè)出復(fù)雜原料藥中含量極低的物質(zhì),，且檢測(cè)過(guò)程中目標(biāo)化合物所受干擾亦較大，目標(biāo)化合物與其它雜峰之間的分離難度較大,。
在缺少質(zhì)譜儀的情況下,，
中國(guó)藥企如何走出雜質(zhì)痕量檢測(cè)的困境呢,？
/Father's day/
基于以上痕量檢測(cè)的難點(diǎn)，沒(méi)有質(zhì)譜儀的幫助,，實(shí)驗(yàn)人員是否可以通過(guò)長(zhǎng)期大量的研究,，不斷嘗試各項(xiàng)色譜條件的調(diào)試，諸如：流動(dòng)相試劑的組成,、梯度程序設(shè)置,、柱溫、流速的改變等,。
特別是色譜柱的篩選,，如雖然同樣都是十八烷基硅烷鍵合色譜柱，可以嘗試不同品牌,、不同系列的C18柱,，色譜柱間填料的差異會(huì)呈現(xiàn)出對(duì)樣品的不同選擇性。另外,，色譜柱規(guī)格的差異也會(huì)帶來(lái)不同的檢測(cè)效果,，如色譜柱的內(nèi)徑越細(xì)靈敏度越高、色譜柱越長(zhǎng)柱效越高,、填料的粒徑越小分離效率越高……光是色譜柱就有多達(dá)7項(xiàng)以上的可調(diào)節(jié)參數(shù),。
最近就有一家藥企嘗試走了這樣一條路，對(duì)尼扎替丁中所含痕量雜質(zhì)N-ya硝基二甲胺（NDMA）檢測(cè)方法進(jìn)行了長(zhǎng)期研究,，最終探索出一種采用HPLC法測(cè)定樣品中NDMA的方法,，該方法簡(jiǎn)便快速，且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確,。
這就是湖南威特制藥股份有限公司,。在他們的開(kāi)發(fā)報(bào)告中記錄到：
“我們首先嘗試解決了色譜分離的問(wèn)題,，因供試品溶液濃度很大,，其他峰對(duì)目標(biāo)物質(zhì)NDMA的干擾較多，在摸索優(yōu)化檢測(cè)方法的過(guò)程中,，對(duì)色譜柱的選擇做了大量的工作,，既要不被干擾，又要保證峰形正常,，且需能夠增加該峰的檢出能力,，最后選擇了特定的月旭Ultimate® ODS-3 4.0×250mm，3μm色譜柱,，且此型號(hào)的色譜柱批間差異較小,。保證了該方法成功通過(guò)了方法學(xué)驗(yàn)證，并最終獲得了發(fā)明專li授權(quán),。”
湖南威特測(cè)試了來(lái)自至少4個(gè)色譜柱廠家的十幾種C18柱,，最終月旭Ultimate® ODS-3 4.0×250mm,，3μm這款柱子展現(xiàn)了其du特的分離和檢測(cè)特性，4.0mm內(nèi)徑具有更高的靈敏度,，3μm粒徑也提供了更高的柱效,。在這款色譜柱的基礎(chǔ)上，客戶繼續(xù)配合優(yōu)化其他的色譜條件,，最終確定了這個(gè)簡(jiǎn)便快捷,，且測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確的HPLC方法。
艱辛的付出,，終于獲得了回報(bào),。感謝湖南威特為我們示范了超高的液相方法開(kāi)發(fā)水平，展示了不同色譜條件配合玩轉(zhuǎn)色譜柱,，為方法開(kāi)發(fā)帶來(lái)的無(wú)限可能,！
參考文獻(xiàn)：
一種HPLC法檢測(cè)尼扎替丁中N-ya硝基二甲胺的方法
（專li號(hào)：ZL202110045224.4；授權(quán)公告日：2023.07.28）
附：Ultimate® ODS-3色譜柱技術(shù)參數(shù)
