流動(dòng)相是高效液相檢測中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié),,其操作的合規(guī)性和準(zhǔn)確性直接影響到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性。在日常檢測中,,我們經(jīng)常會(huì)遇到流動(dòng)相含有揮發(fā)性試劑(如三氟yi酸(TFA),、三乙胺、濃氨等)的情況,;也會(huì)遇到含粘度較高的組分(如磷酸等),。這些組分在流動(dòng)相配置時(shí),其添加方法需要特別注意,,以免因試劑揮發(fā)或放液不wan全而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
三乙胺是液相流動(dòng)相中常用的一種組分,起到調(diào)節(jié)pH,,屏蔽固定相上的硅羥基從而修飾峰形,,改善峰拖尾等作用。同時(shí)它也是一種揮發(fā)性試劑,,如按常規(guī)方法,,在液面以上放液,就會(huì)出現(xiàn)因三乙胺揮發(fā)導(dǎo)致的流動(dòng)相配置不準(zhǔn)確的情況,,因此在添加三乙胺等揮發(fā)性試劑時(shí),,建議選用量入式移液管,伸至液面以下再放液,。
示例
某項(xiàng)目,,流動(dòng)相為:15mmol/L磷酸二氫鉀溶液(含0.06%三乙胺和0.14%磷酸)
流動(dòng)相配置一:常規(guī)配置方法,三乙胺在液面以上放液,,配置流動(dòng)相,。
通過以上兩圖對比可發(fā)現(xiàn),,不同的流動(dòng)相配置操作,會(huì)導(dǎo)致出峰時(shí)間的明顯變化,。
結(jié)論
配置流動(dòng)相時(shí),,要按不同試劑的特性選擇合適的配制方法,不能一概而論,。
1)對于揮發(fā)性試劑,,如三乙胺,二乙胺,,三氟yi酸,,七氟丁酸等,添加時(shí),,為避免揮發(fā)導(dǎo)致濃度差異,,配置時(shí)將移液管插入到液面以下再放液。
2)對于粘稠試劑,,如磷酸,,量取時(shí)要盡量慢,吸取完畢后用紙巾擦拭管口周圍,,避免試劑附著在管口,,影響添加試劑的濃度。添加時(shí),,要注意放緩放液速度,以避免因放液過快,,部分試劑還附著在移液管壁沒有流下,,導(dǎo)致流動(dòng)相的濃度差異。
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