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色譜峰形的隱藏“殺手”——溶劑效應(yīng)
在液相系統(tǒng)分析過程中,，有沒有遇到過峰前延,、色譜峰展寬,，分叉等現(xiàn)象？為什么有時(shí)候同一個(gè)樣品減小進(jìn)樣量色譜峰就變的很好看,？日常的分析工作中,，我們通常將更多精力集中在流動(dòng)相和儀器方法的選擇上，忽視了樣品進(jìn)樣溶劑的重要性,。如果溶劑選擇不當(dāng)則會(huì)產(chǎn)生“溶劑效應(yīng)",，使我們?cè)诙ㄐ院投糠治鲋挟a(chǎn)生誤判，影響分析結(jié)果,。
什么是溶劑效應(yīng)
通常情況下對(duì)于溶劑效應(yīng)的理解為：稀釋劑溶劑強(qiáng)度大于流動(dòng)相時(shí)造成色譜峰變形的現(xiàn)象。
舉例：用純乙腈溶解樣品,，注入流動(dòng)相為乙腈-水（18:82）的反相系統(tǒng)中,，會(huì)造成峰分叉或拖尾的結(jié)果，而采用流動(dòng)相來溶解樣品,，峰形又會(huì)恢復(fù)正常,。
用通俗的話來描述，溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生是由于樣品溶劑與流動(dòng)相不匹配引起的,。
樣品溶劑與流動(dòng)相的“不匹配"包括：
● 二者的洗脫能力差異,。
● 二者的互溶能力差異。
● 樣品分子在二者中的溶解性差異,。
● 樣品分子在二者中分子態(tài)和離子態(tài)的分布差異,。
溶劑效應(yīng)產(chǎn)生的機(jī)理
色譜分析，進(jìn)樣過程可分為三個(gè)階段：
● 第一個(gè)階段是樣品到達(dá)色譜柱,。
● 第二階段是樣品部分進(jìn)入色譜柱,。
● 第三個(gè)階段是樣品全部進(jìn)入色譜柱。
而溶劑效應(yīng)主要產(chǎn)生于進(jìn)樣過程的第二個(gè)階段,，即樣品部分進(jìn)入色譜柱,。
而在這一階段中，溶劑效應(yīng)的產(chǎn)生機(jī)理可以用三個(gè)部分來進(jìn)行闡述：
● 樣品剛被注入系統(tǒng),，進(jìn)入色譜柱后,，流動(dòng)相氛圍中的目標(biāo)物以正常速度被洗脫。因強(qiáng)溶劑洗脫,，移動(dòng)速度快,，樣品在空間上開始慢慢分裂。
● 在一定時(shí)間內(nèi),，溶劑氛圍中的目標(biāo)物移動(dòng)始終快一些,，前后兩部分距離擴(kuò)大,。但移動(dòng)快的目標(biāo)物所處氛圍逐漸被流動(dòng)相稀釋(注：因?yàn)槿軇┖土鲃?dòng)相均不保留)，其移動(dòng)速度會(huì)逐漸降至正常流速,。直到前面目標(biāo)物的氛圍wan全被流動(dòng)相替代,，前后兩部分的距離穩(wěn)定下來。因而,，樣品溶劑與流動(dòng)相洗脫強(qiáng)度差距越大,，兩部分目標(biāo)物最終的距離拉的越大。
● 所有目標(biāo)物在色譜柱中正常移動(dòng),，但分裂已不可逆轉(zhuǎn),。
經(jīng)過檢測器，同一目標(biāo)物給出了兩個(gè)色譜峰,。其中進(jìn)柱前即擴(kuò)散進(jìn)入流動(dòng)相的那部分目標(biāo)物組成了后面的色譜峰,，它的保留時(shí)間與目標(biāo)物的真實(shí)保留時(shí)間基本吻合。
如何解決溶劑效應(yīng)
1.溶劑強(qiáng)度
對(duì)于這一zui普遍的溶劑效應(yīng),，解決辦法即調(diào)整稀釋劑或流動(dòng)相,，使二者洗脫能力接近，或稀釋劑洗脫能力稍低于流動(dòng)相都是可以的,。一般情況下,，為避免溶劑強(qiáng)度差異導(dǎo)致的溶劑效應(yīng)，反相色譜中較為穩(wěn)妥的做法是稀釋劑與流動(dòng)相保持一致,，若流動(dòng)相或流動(dòng)相中的有機(jī)相無法直接溶解樣品,，則用可以溶解樣品的溶劑溶解成高濃度儲(chǔ)備液，然后用流動(dòng)相稀釋至所需濃度,。
2.降低進(jìn)樣體積
當(dāng)樣品溶劑洗脫能力大于流動(dòng)相時(shí),，由于樣品溶劑瞬時(shí)流動(dòng)相的作用，容易產(chǎn)生峰形前延,。峰形前延的程度與進(jìn)樣量有關(guān),，進(jìn)樣量越大，前延越厲害,，溶劑效應(yīng)越明顯,。反之進(jìn)樣量越小，溶劑效應(yīng)也越小,。因此降低進(jìn)樣體積能有效削弱或消除溶劑效應(yīng),。
3.電離狀態(tài)
電離狀態(tài)的差異許多情況下會(huì)表現(xiàn)為保留時(shí)間的漂移或不穩(wěn)定?？梢酝ㄟ^將樣品溶液的pH調(diào)節(jié)至與流動(dòng)相一致,，或增大流動(dòng)相的緩沖能力來改善。
4.柱前管路
對(duì)于梯度洗脫而言，在不影響分離度的情況下,，可以改用較粗內(nèi)徑的柱前管路,。（注意：若是等度洗脫，此方法會(huì)降低柱效,；若是梯度洗脫,，基本不影響柱效）。