不同的色譜柱的清洗方法有什么不同,?
高效液相色譜柱是消耗品,,會隨使用時間或進(jìn)樣的次數(shù)增加,,出現(xiàn)色譜峰高降低,,峰寬加大或出現(xiàn)肩峰,柱效下降,。需要定期進(jìn)行清洗和再生,,不同的色譜柱清洗方法各不相同比如:
1 反相柱 分別用甲醇:水=90:10,,純甲醇(HPLC級),異丙醇(HPLC級),,二氯甲烷(HPLC級)等溶劑作為流動相,,依次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的色譜柱體積.然后再以相反的次序沖洗,。
2 正相柱 分別用正己烷(HPLC級),,異丙醇(HPLC級),二氯甲烷(HPLC級),,甲醇(HPLC級)等溶劑做流動相,,順次沖洗,每種流動相流經(jīng)色譜柱不少于20倍的柱體積(異丙醇粘度大,,可降低流速,,避免壓力過高).注意使用溶劑的次序不要顛倒,用甲醇沖洗完后,,再以相反的次序沖洗至正己烷,,所有的流動相必須嚴(yán)格脫水。
3 離子交換柱 長時間在緩沖溶液中使用和進(jìn)樣,,將導(dǎo)致色譜柱離子交換能力下降,,用稀酸緩沖溶液沖洗可以使陽離子柱再生,反之,,用稀堿緩沖溶液沖洗可以使陰離子柱再生,。
另外,還可以選擇能溶解柱內(nèi)污染物的溶劑為流動相做正方向和反方向沖洗,。但再生后的色譜柱柱效是不可能恢復(fù)到新柱的水平的.如果柱子裝反了,,可以調(diào)回來,但可能會造成柱內(nèi)擔(dān)體塌陷.在不得已的情況下盡量不要反裝色譜柱,。