高效液相色譜中溶劑與檢測(cè)器的兼容性
在高效液相色譜中,溶劑是指用于制備流動(dòng)相,、溶解和輸送樣品的溶液,。流動(dòng)相是影響HPLC的性能的主要因素,,它的性質(zhì)必須滿足HPLC測(cè)試的嚴(yán)格要求,。在選擇溶解樣品的溶劑和其他與制備樣品有關(guān)的溶劑時(shí),,同樣也需考慮這些溶劑的性質(zhì)與檢測(cè)器的兼容性。
01
UV檢測(cè)器
在樣品的檢測(cè)波長(zhǎng)下,,所選流動(dòng)相的吸光度最好是A<0.2AU,,特別是在梯度洗脫中,較低的吸光度意味著能獲得更好的檢測(cè)精度和更好的結(jié)果,。但是,,在等度洗脫中吸光度稍高的溶劑也是可以接受的。選用紫外檢測(cè)波長(zhǎng)低于200nm的溶劑是很罕見的,,除非是用于檢測(cè)那些在高于200nm波長(zhǎng)處吸光度低的物質(zhì),。
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因?yàn)樗诖笥诘扔?00nm波長(zhǎng)都無(wú)紫外吸收,所以含水流動(dòng)相的吸光度,,等于純?nèi)軇┑奈舛瘸艘粤鲃?dòng)相B溶劑的體積分?jǐn)?shù)φ,。例如,在215nm波長(zhǎng),,當(dāng)B為以下各種不同溶劑時(shí),,含有25%B溶劑的流動(dòng)相的吸收值A(chǔ)分別對(duì)應(yīng):乙腈,0.00AU,;甲醇,0.09AU,;脫氣甲醇,,0.05AU;四氫呋喃,,0.22AU,;異丙醇,0.07AU,。注意,,脫氣甲醇降低了氧氣在純?nèi)軇┲械臐舛龋瑢?dǎo)致在200~240nm波長(zhǎng)下,,吸光度降低了接近1/3,。當(dāng)用充氦氣的方法進(jìn)行流動(dòng)相脫氣后,由于溶劑中氧氣含量的比例下降,流動(dòng)相中的B溶劑吸光值也會(huì)降低,。氧氣在低極性溶劑(如四氫呋喃和異丙醇)中溶解度更高,,因此,在實(shí)踐當(dāng)中,,低極性溶劑的吸光值可能會(huì)比理論值更高,。(理論值見<液相色譜方法開發(fā)中紫外吸收波長(zhǎng)的選擇>)
水在波長(zhǎng)≥200nm時(shí)無(wú)吸收,這是假定水是經(jīng)過(guò)嚴(yán)格純化的,。HPLC級(jí)水在ASTM D1193中有詳細(xì)說(shuō)明,。在低波長(zhǎng)中檢測(cè),有時(shí)不但會(huì)要求水中的總有機(jī)碳(TOC)低于50ppb,,而且要有足夠高的電阻率,。
02
RI檢測(cè)器
在等度洗脫中,流動(dòng)相的選擇通常不受RI檢測(cè)器的限制,??赏ㄟ^(guò)選擇折光率跟樣品成分折光率有較大差異的流動(dòng)相,從而提高檢測(cè)靈敏度,?;诓罘譁y(cè)量的檢測(cè)器(如:RI)不能用于梯度洗脫。因?yàn)橥ǔG闆r下A,、B溶劑之間的響應(yīng)值相差很大,。
03
MS檢測(cè)器
流動(dòng)相在MS接口蒸發(fā),流動(dòng)相一般由水,、有機(jī)溶劑組成,,揮發(fā)性添加劑的使用也很常見(添加劑不能是非揮發(fā)性緩沖劑或鹽)。因?yàn)橐呀?jīng)去除流動(dòng)相,,所以在LC-MS中并不存在流動(dòng)相的紫外吸收,,但是溶劑中不能有顆粒存在。